家蚕微粒子病是蚕业生产中的重大疫病,生物防治是农业生产技术发展的重要方向之一。本项目在证实家蚕(Bombyx mori)消化道来源肠球菌(enterococci)分泌物中存在对家蚕微粒子虫(Nosema bombycis)孢子具有明显抑制作用(in vitro和in vivo)的蛋白因子等的基础上,进一步应用低、高压层析和2D-PAGE等技术纯化该因子,通过对该蛋白的氨基酸一级结构的测定和同源物检索等,设计简并引物,然后克隆该基因和测定核酸序列,研究分析该基因的结构特点,并在体外表达活性产物。同时应用电泳和抗体技术等监测纯化过程,以及活性物功能分析。通过研究分析该活性因子的蛋白质、基因、生物功能的特征和相互关系,解明肠球菌来源抑制家蚕微粒子虫孢子发芽蛋白因子的分子机理。为家蚕微粒子病的生物防治提供理论依据。
家蚕微粒子病是蚕业生产中的重大疫病,生物防治是农业生产技术发展的重要方向之一。从MRS和BM培养基获得了对家蚕微孢子虫孢子发芽具有抑制活性的家蚕来源肠球菌的活性物。研究发现对家蚕微孢子虫孢子发芽具有抑制活性的家蚕来源肠球菌不仅在生理生化上存在多样性,在核酸分子水平同样具有丰富的多样性(RAPD),这些分离菌株经16S rDNA分子鉴定和发育进化分析发现均为蒙氏肠球菌(GenBank登录序列号分别为DQ287982、DQ462329、DQ462330、DQ469877、DQ469876和DQ462332)。获得了与发芽相关的微孢子虫微管蛋白(α和β,Assension No.EF051590和No.EF151928),并证实在系统发育上与接合菌、担子菌和壶菌具有较近的亲缘关系,这些研究结果为抑制活性物的获取提供了重要的线索。