固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)与硬脂酰辅酶A脱氢酶(SCD)在奶牛乳腺细胞的脂类代谢基因调控中发挥重要作用,序列比对发现在SCD启动子上具有与SREBP1转录因子的结合位点,但SREBP1对于SCD的作用机制还需要进一步证明。本项目首先构建SCD基因的启动子载体与SREBP1蛋白真核表达载体,然后二者共转染奶牛乳腺MAC-T细胞,通过荧光素酶报告基因研究SREBP1蛋白的过表达对于SCD启动子转录活性的调控作用,凝胶迁移率实验和抗体超迁移实验确证SREBP1与SCD启动子位点的特异结合。然后在共转染的基础上,细胞培养液加入共轭亚油酸(CLA)进行处理,westen-blotting检测膜结合的前体SREBP1蛋白和核内成熟SREBP1蛋白的含量变化,探讨在不饱和脂肪酸处理下,SREBP1调控SCD基因启动子的作用机制。
英文主题词SREBP1;SCD;mammary epithelial cell;transcription;expression