中文摘要：

提高菜籽中油酸含量可以改善其油的品质，因此培养高油酸油菜是当前油菜育种的一个重要方向。转录因子是生物体众多的基因中很重要的一类，在调控基因表达方面有着重要作用。申请人已经从甘蓝型油菜油酸突变体消减抑制杂交文库中筛选到一个与高油酸性状高度相关的转录因子Bn225，其与拟南芥转录因子At5g38370有90.5%的氨基酸序列同源性。克隆了Bn225与At5g38370的保守区，用RNAi干扰方法分别在油菜和及拟南芥种子中抑制其表达，得到饱和脂肪酸大大提高的转基因植株。在前期的研究基础上，本项目拟构建该转录因子的过表达载体转化拟南芥和油菜，得到转基因纯系后，利用拟南芥基因芯片分别检测过表达、沉默表达和野生型植株基因表达情况来确定Bn225的靶基因。同时辅以Pull-down技术鉴定Bn225调控的靶基因。本项目旨在通过该转录因子改变脂肪酸组成机理的了解来更进一步了解脂肪酸合成和去饱和途径。

结论摘要：

本项目开展以来，在下面几个方面获得一定的研究成果 1、获得种子脂肪酸组成改变的转基因油菜植株 共获得10个株系的Bn225基因过表达的T4代转基因油菜，4个株系的Bn225基因干扰表达的T6代转基因油菜。过表达转基因油菜与对照比较，油酸含量提高3.3%-16.1%。干扰表达转基因油菜与对照比较油酸含量下降4.9-11.0%。 2、高、低油酸转基因油菜种子差异表达基因分析 利用了基因芯片技术和免疫共沉淀技术对高、低油酸转基因油菜种子差异表达基因进行了分析。基因芯片分析得到1012个差异表达基因。免疫共沉淀分析得79个与转录因子相互作用的DNA片段。通过在NCBI数据库以及白菜、甘蓝基因组数据库进行比对，获得了75个DNA片段所代表的基因或基因上游的调控序列。综合分析基因芯片和免疫共沉淀所获得的数据，有69个差异基因是在这两组数据中共有的，包括oleoyl-acyl-carrier-protein、ATP binding protein、acyl-ACP thioesterase A、palmitoyl protein thioesterase family protein、Acyl Carrier Protein、Lipid Transfer Protein和其他转录因子基因。 3、Bnhol34基因的表达分析 Bnhol34基因是69个差异基因中的一个，该基因属于植物胚胎发育晚期丰富白( LEA)基因。我们克隆了该基因的全长序列及其启动子序列（HQ585980），并在油菜中对该基因进行了表达分析。研究发现Bnhol34在种子成熟后期表达较高，并且脱落酸处理可以提高该基因的表达。 4、油菜油酸脱氢酶基因（fad2）启动子序列分析 目前在油菜中对fad2的表达调控研究还不多，我们从甘蓝型油菜中克隆了fad2基因一段2,374 bp的上游调控序列(KF038144)，通过生物信息学分析确定其启动子范围和各类元件。5′RACE发现该启动子内部含有一段1,254 bp的内含子。启动子缺失分析证明了fad2基因的核心启动子区在-220至-1bp区域，同时也证明了启动子内部与光、温度和脱落酸调节的各类顺式作用元件。同时还发现内含子序列具有加强fad2基因表达的功能。