动脉粥样硬化(AS)是严重危害人类健康的常见病,是缺血性心脑血管病的重要病理基础。本课题研究与AS发生相关的锌指基因ZNF580及小鼠同源基因ZFP580的功能。以重叠延伸PCR改造人ZNF580基因稀有密码子,表达纯化人ZNF580蛋白,制备多克隆抗体;以真核表达载体及空载体转染人脐静脉内皮细胞,基因芯片分析两组细胞的差异表达基因,利用Real-Time PCR分析ZNF580所调控的下游靶基因;采用基因转染技术,获得瞬时高表达和低表达ZNF580的内皮细胞,用MTT和Transwell法分析ZNF580对内皮细胞增殖、迁移活性的影响;ZNF580基因调控MMP-2和VEGF的表达;应用酵母双杂交技术,筛选与ZNF580相互作用蛋白,免疫共沉淀及免疫荧光共定位验证ZNF580与SMAD2相互作用。建立小鼠AS模型,免疫组化技术检测ZFP580在AS模型小鼠及正常小鼠主动脉内皮细胞、平滑肌细胞中的差异表达。在动物整体、基因水平、蛋白水平阐明ZFP580在AS发生、发展中的作用。研究结果:已发表SCI论著1篇,被Genbank引为ZNF580基因功能首篇论著,核心期刊发表论著6篇 。
英文主题词Atherosclerosis; ZNF580; ZFP580;Gene chip; co-immunoprecipitation