中文摘要：

采用实时荧光定量PCR、Westen blot杂交，兔基因(DNA和cDNA)文库筛选及DNA结合蛋白生物信息学预测分析、纯化技术，以兔SO细胞为模型，分析高胆固醇对兔SO细胞Kca通道α和β亚基mRNA水平和蛋白质表达水平的变化特征、影响mRNA表达的Kca通道亚基的作用位点、基因表型特征及对SO细胞[Ca2+]i代谢调节的作用。在成石物质代谢紊乱的基础上从基因水平探讨胆固醇导致胆管SO功能异常的发病机制及胆囊成石环境形成的始发因素，为阐明胆固醇代谢紊乱导致胆管系统疾病的基因调控功能异常的分子生物学途径提供实验和理论依据。

结论摘要：

高胆固醇血症所致胆囊结石发病机制不明。本课题重点探讨SO细胞BKca通道功能与高胆固醇血症诱发胆囊结石的关系，为胆囊成石早期诊断的分子显像提供基础。在证实高胆固醇血症可致胆管括约肌细胞[Ca2+]i 过载的基础上，研究证实胆固醇代谢紊乱诱发细胞质膜BKca通道的活性下调导致细胞膜电位超极化不全是SO 细胞[Ca2+]i 超载的主要原因之一，而细胞[Ca2+]i过载导致的钙振荡的物理特征改变是胆管括约肌功能紊乱、胆囊发生淤胆的基础；高胆固醇血症兔SO细胞BKca通道β1 亚基mRNA和蛋白表达量均明显低于对照组(P＜0.05）；采用cDNA末端快速扩增及LA-PCR技术首次从兔SO细胞扩增出BKca通道新的β1基因（Gen Bank accession nos. DQ821756 和DQ839485）；确定了BKca通道β1亚基基因启动子位点；采用RT-PCR法测定了BKca通道a亚基cDNA序列，构建了真核细胞表达载体PcDNA3.1－a和PcDNA－β。研究结果为胆固醇代谢紊乱诱发细胞质膜BKca通道的活性下调可能与钙调蛋白对细胞[Ca2+]i的敏感性降低有关提供了基础。