中文摘要：

上皮钉突样结构的缺乏是体外构建组织工程化口腔粘膜的上皮与支架出现分离的主要缺陷之一。口腔粘膜上皮钉突最丰富的部位皆与咀嚼压力相对应；而当生理应力作用时，细胞外信号调节激酶ERK1/2被迅速激活且磷酸化程度大幅升高；两者之间的关联促使本课题拟探讨角化细胞被加载外力后在口腔粘膜上皮钉突形成过程中的表现，并分析ERK1/2在其中的调控作用。在观察口腔粘膜中ERK1/2的表达与上皮钉突结构的空间位置关系后，于加压载荷的情况下培养人口腔粘膜的角化细胞，检测ERK1/2的表达水平。在蛋白水平抑制ERK1/2及其介导的酶联反应，观察应力刺激诱发的ERK1/2表达及其介导的酶联反应在角化细胞增殖和钉突形成中的作用。在加压载荷的培养环境下，记录口腔粘膜角化细胞中的前体细胞增殖分化过程和迁徙的关系；试图说明外力促进ERK1/2的高表达，使角化细胞增殖加速，形成上皮钉突样结构，并增强了上皮与支架之间的粘附力。

结论摘要：

上皮钉突样结构的缺乏是体外构建组织工程化口腔粘膜的上皮与支架出现分离的主要缺陷之一。口腔粘膜上皮钉突最丰富的部位皆与咀嚼压力相对应；而当生理应力作用时，细胞外信号调节激酶ERK1/2被迅速激活且磷酸化程度大幅升高；两者之间的关联促使本课题拟探讨角化细胞被加载外力后在口腔粘膜上皮钉突形成过程中的表现，并分析ERK1/2在其中的调控作用。本课题主要研究ERK1/2的活化与口腔黏膜上皮钉突形态发生之间的关系:(1)对小鼠口腔黏膜上皮钉突的胚胎发育过程及出生后上皮钉突形态变化的研究发现小鼠口腔黏膜上皮钉突在胚胎期形成不明显，出生后，小鼠口腔黏膜继续发育，加上口腔各项功能的发挥上皮钉突形成，长度变长、形态变复杂；(2)对人不同部位口腔黏膜上皮钉突的形态特征研究发现人口腔黏膜上皮钉突主要分为三类简单上皮钉突、复杂上皮钉突、网状上皮钉突；且上皮钉突长度与口腔黏膜中ERK12、 Ki67 、CK19 的表达存在相关关系；ERK1/2、CK19在基底层的表达与上皮钉突长度呈负相关；Ki67的表达与钉突的长度呈正相关；（3）对体外培养的口腔黏膜角化细胞施加机械刺激并检测口腔黏膜角化细胞内磷酸化ERK1/2的表达水平，结果显示受力后角化细胞内的p-ERK1/2活化水平表现为先减低后增高，而对照组未出现明显的改变，说明口腔黏膜角化细胞内ERK1/2的活化与力有关，在人口腔中则表现为与咀嚼力有关；（4）为了验证机械力对口腔黏膜上皮钉突形成的作用，我们应用体外培养的口腔黏膜角化细胞、成纤维细胞及Ⅰ型鼠尾胶原构建了组织工程化口腔黏膜三维培养模型，并在此口腔黏膜三维模型上对组织工程化口腔黏膜施加机械力刺激检测口腔黏膜角化细胞ERK1/2、PAK1表达的变化，结果显示机械力刺激可使ERK1/2、PAK1的表达明显升高，ERK1/2、PAK1的高表达与角化细胞的增殖和分化相关，可促使口腔黏膜上皮钉突的形成；（5）在基本完成课题研究的基础上我们还应用光镜、透射电镜和扫描电镜对不同部位口腔黏膜（咀嚼黏膜和被覆黏膜）上皮结缔组织连接区做了详细观察，主要观察了两种黏膜的上皮与结缔组织连接结构半桥粒和基底膜区的形态特征和差异。这些研究可为进一步构建组织工程仿生口腔黏膜提供有价值的参考。