中文摘要：

目前，关于血瘀证形成机理的研究，已不仅限于观察血液本身的改变，更多关注血管改变与血瘀证形成的关系，血管内皮细胞功能的变化成为研究的热点。本课题在中医理论指导下，根据血瘀证形成机理复杂、多以兼证出现、不同证型具有不同生化物质基础的特点，在已有的工作基础上，吸收最近关于microRNA被发现在心血管系统疾病中具有重要作用，某些特异性的microRNA能调节血管内皮细胞功能等研究成果，利用已建立的病证结合血瘀证血管内皮细胞损伤模型，使用Solexa技术等技术获取并鉴定与血瘀证各型相关的血管内皮细胞microRNA和他们各自的靶基因，并通过体外细胞转染验证microRNA和靶基因的作用，筛选与血瘀证相关的标志物，探讨各型血瘀证的microRNA作为药物治疗靶点的可能性。阐明microRNA在血瘀证形成中的作用机制，为血瘀证分型提供重要科学依据，为中医药防治血瘀证提供新的治疗策略和治疗靶点。

结论摘要：

本项目利于高血压和糖尿病不同证型（气滞血瘀、气虚血瘀、热结血瘀、寒凝血瘀及非血瘀）患者血清干预血管内皮细胞，采用Ilumina高通量测序方法进行全基因组表达和miRNA测序，筛选与血瘀相关的miRNA和mRNA，进行体内外验证，结果显示（1）高血压血瘀证与非血瘀证间表达差异显著基因集中在内质网应激通路上，如ATF4、ATF3、eIF1、HSPA5、XBP1和JNK等；（2）miRNA—基因联合分析显示ATF4与miR-1283，eIF1与miR-548e、-137、-188-5p，JNK与his-miR429，XBP1与his-miR-548k、his-miR-320存在负协同作用；（3）荧光素酶靶标验证显示ATF4是miR-1283的靶基因，体内外实验发现miR-1283抑制和ATF4过表达可加重血管内皮损伤，其机制与miR-1283调控ATF4影响PERK-elF2a-ATF4-CHOP通路相关。（4）miR-520b调节IL-8在血瘀证中发挥作用，可能为TanⅡA作用靶点。（5）糖尿病血瘀证与非血瘀证之间mRNA与miRNA存在显著差异，其中MIB1、IPMK、MARCKS可能与气虚血瘀相关；RP11-365PB.3、TTPA可能与气滞血瘀相关；RP11-488L18.10、FZD8、DNAH7、WNK3可能与寒凝血瘀相关；ZFP112、MIB1、MBNL2、LRRC58、CYB5R2、ZNF-404、RFX7、CD2AP、CTD-2228K2.7、ZNF492、AC097374.2、LAMA1可能与热结血瘀相关；（6）糖尿病表达差异基因多数富集于神经系统疾病、肿瘤发生发展、受体脂肪酸链的延长、糖胺聚糖的生物合成等相关通路。（7）荧光素酶系统验证显示miR-149-5p与TNF、miR-3176 mimic与E2F1、miR-328-3p与CHST7、miR-324-3p与RAC3存在靶标关系。（8）将高血压与糖尿病血瘀数据进行比对整合，显示与气虚血瘀、气滞血瘀、寒凝血瘀、热结血瘀证相关的miRNA分别有181、184、156和158个；与血瘀证相关的miRNA有51个。以上发现在中医理论指导下，引进分子生物学新技术，筛选与血瘀证相关的miRNA及其靶基因，分析其作为血瘀证相关的生物标志物及药物治疗靶点，为血瘀证诊断和治疗及血瘀证的研究提供了新的研究思路。