中文摘要：

此前我们探讨了接头蛋白Crk信号系统在卵巢癌恶性生物学行为中的作用，证实Crk在卵巢癌浸润转移等致瘤作用中的意义，并且验证了是Crk/Dock180/Rac1信号途径在卵巢癌细胞恶性浸润潜能中发挥主要作用。不过我们发现在Dock180表达缺失性细胞中，除恶性浸润潜能受挫外，在Dock180表达水平及其介导之Rac1酶活性降低的同时，Crk的另一个下游结合蛋白C3G表达明显增加，而且由其介导之另一个小分子GTP连接酶Rap1活性明显被激活。本项目拟通过对卵巢癌组织和细胞内Crk/Dock180/Rac1以及C3G/Rap1两个信号通路中相关蛋白表达水平的检测，分析C3G/Rap1信号通路与卵巢癌恶性行为及预后的可能关系；并且通过DN及CA突变正、反两方面干预，明确有效激活C3G/Rap1途径能否抑制卵巢癌细胞的细胞动力，遏制其恶性浸润潜能，明确该信号路径能否作为内在性肿瘤抑制机制治疗卵巢癌。

结论摘要：

1. 该项目申报的目的是希望证实可能位于Crk下游的信号分子C3G在卵巢癌中是否作为抑癌基因蛋白起作用。在初始对40例卵巢癌组织中两个信号通路的相关蛋白表达的测定中，有2/3的样本表现出C3G与Dock180表达水平呈相反趋势，似乎都提示这两个信号途径之间作用应该是相反的。不过在扩大样本量对卵巢癌组织标本的C3G表达及其与生存预后的相关性分析，显示C3G表达与组织分级呈正相关，也就是说与肿瘤的恶性程度呈正相关，而且对不同侵袭潜能的卵巢癌细胞株进行检测结果提示两株高侵袭性卵巢癌细胞SKOV3和HEY均表现出更强的C3G表达，而侵袭力更弱的OVAR3细胞呈明显低表达，提示由C3G对低分化浆液性卵巢癌的高侵袭力有作用。 2. 利用上述两株高侵袭性浆液性卵巢癌细胞SKOV3及HEY，构建C3G表达敲低的细胞模型，表型验证提示其在上游分子即接头蛋白Crk表达水平不受影响，该分子表达缺失后肿瘤细胞的侵袭能受挫（表现在体外浸润能下降，血管内渗、外渗能力受限），而这种影响对细胞增殖增殖似乎不大（Cellomics活细胞计数），而且有趣的是，我们的动物实验提示该分子可能参与了卵巢癌脏器转移而非腹膜/网膜种植，而脏器转移常常是影响卵巢癌满意肿瘤细胞减灭术的直接原因，因此与预后直接相关； 3， 为了进一步证实上述动物实验结果在卵巢癌中是否具有普遍性，我们对10例上皮性卵巢癌原发癌灶，网膜转移灶以及内脏器官转移灶(包括肠转移灶和淋巴结转移灶)的新鲜组织进行了Crk/C3G/Rap1信号通路中相关蛋白以及Rac1/Rap1酶活性的检测，结果发现其实该两个信号通路均可能参与了肠道转移。在对C3Gi/Docki/Elmo1i细胞的Rac1活性检测中发现三者的Rac1酶活性均受到下调，提示C3G可能作用于Dock180上游影响着卵巢癌细胞的细胞动力,目前正在通过分别干预此两个分子进行进一步验证。