中文摘要：

HPV感染是导致宫颈癌发生的主要原因，HPV诱导宿主细胞基因甲基化导致抑癌基因失活可能是宫颈癌发生的重要机制，但其如何诱导细胞抑癌基因发生高甲基化及作用于哪些基因尚不明了。我们前期研究证实HPV阳性细胞系中抑癌基因RASSF1A，PAX1，DAPK1及p16等的表达与阴性宫颈癌细胞系不同，这种不同与抑癌基因的异常甲基化有关，表明HPV感染可诱导细胞抑癌基因发生甲基化。本研究首先自HPV阳性细胞系筛选出因甲基化而沉默的抑癌基因，进而检测目标基因在HPV阳性和阴性正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的甲基化状态。比较宫颈癌发生发展各阶段抑癌基因甲基化状态的异同，明确宫颈癌及癌前病变组织中因HPV感染而诱导沉默的抑癌基因以及目标基因甲基化与临床病理特征的关系，筛选出宫颈癌发生发展特异的HPV相关表观分子遗传学标记物，为阐明病毒诱导甲基化发生机制及早期诊断、预测预后和个性化治疗提供实验基础。

结论摘要：

本研究旨在筛选和鉴定由于HPV感染而异常甲基化的基因或异常表达的miRNA，探讨HPV导致宫颈癌发生的表观遗传学机制。分析甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理前后HPV阳性和阴性宫颈癌细胞系基因表达谱，筛选出HPV相关性候选抑癌基因共13条。采用携带外源性E6/E7融合基因的重组慢病毒，感染HPV阴性宫颈癌细胞系HT-3，进一步联合甲基化、表达谱及miRNA芯片技术对表达融合蛋白的HT-3E6E7细胞进行检测，以排除不同宫颈癌细胞系遗传背景差异，筛选出166个差异甲基化水平的基因；表达差异的microRNA共18个；通过联合连锁共筛选出9个HPV 相关性差异甲基化基因SBK1，WSCD2，LPGAT1，HRNBP3，SH3BP4，DALRD3，NDUFAF3，PDE10A，CENPF，3个HPV相关性mircoRNAs hsa-miR-6727-5p，hsa-miR-3156-3p，hsa-miR-6841-3p。并在细胞和组织水平对部分基因的甲基化和表达验证分析，初步完成宫颈癌组织中HPV相关表观遗传学致癌机制的研究。对RASSF1A，SPINT2，DKK3及STK31基因异常甲基化在宫颈癌发生发展中的作用机制进行了研究。筛选出的FAM9C, SERPINF1, NMB, LOC388588, HEATR7B1, CFTR，PLIN5，WSCD2及DALRD3基因可能是HPV诱导甲基化而沉默的相关候选基因。miR-6841-3p在宫颈癌发生发展中发挥负向调控作用；hsa-miR-3156-3p在HT-3E67细胞中的表达明显降低，在宫颈癌组织中的表达低于正常宫颈组织，且HPV阳性宫颈癌组织中miR-3156-3p的表达低于HPV阴性宫颈癌组织，表明miR-3156-3p的异常表达可能与HPV感染相关；体外试验证实，miR-3156-3p可促进细胞凋亡，抑制细胞迁移、侵袭及血管新生，提示miR-3156-3p可抑制宫颈癌的发生；在宫颈癌细胞系中，miR-3156-3p可抑制SLC6A6表达，提示SLC6A6可能为miR-3156-3p的靶基因。3种抑癌基因RASSF1A，SPINT2，DKK3和癌基因STK31启动子区异常甲基化参与宫颈癌的发生发展。结果表明HPV可通过诱导相关抑癌基因异常甲基化或相关miRNAs异常表达的表观遗传学机制参与宫颈癌的发生发展。