为探讨GCRV外衣壳蛋白VP5在病毒进入细胞过程中的作用机理,对与起始侵染相关的VP5蛋白自动裂解位点的功能进行研究。实验拟采用原核表达系统,获得高效表达的GCRV外衣壳蛋白VP5及与包涵体形成相关的非结构蛋白NS80,免疫动物,制备特异抗体。通过定点突变技术,对VP5自动裂解位点的编码序列进行突变,并在杆状病毒中表达VP5蛋白突变体(VP5N42mu)。将体外表达的外衣壳蛋白VP5突变体(VP5N42mu)和野生型VP7蛋白(VP7wt)与纯化的GCRV核衣壳组装成突变型重构GCRV颗粒(VP5mur-GCRV)。利用免疫荧光及流式细胞等分析技术,比较突变型VP5mur-GCRV与野生型VP5wtr-GCRV重组病毒的细胞感染与蛋白合成等特性差异,揭示VP5N42功能位点的变异对病毒组装与感染特性的影响,为进一步揭示VP5蛋白在病毒侵染过程中致病的分子机理提供依据。
英文主题词GCRV; Outer capsid protein; Autocleavage site; Functional analysis