本研究以甜菜夜蛾幼虫脂肪体细胞的原代培养为实验模型,借鉴哺乳动物细胞增殖及永生化分子机理的研究,从整体、细胞、分子水平三个层次,比较研究昆虫细胞在体内和体外的差异,探讨昆虫细胞系的建立方法,阐明决定昆虫细胞成系的关键因子和分子机制。主要包括细胞从组织中分离和增殖的诱导,增殖细胞DNA的标记,染色体端粒的变化和端粒酶的活性,染色体数目和倍性的改变等。
Spodoptera exigua;Primary cells;Cell line;SSH;Telomerase
在甜菜夜蛾原代细胞和细胞系中筛选出的198个unique基因中,原癌基因和泛素通路相关基因起主导作用,进一步通过Real-time PCR验证发现,在细胞成系过程中,这些原癌基因和泛素通路相关基因的表达都发生了显著变化,提示这些基因在甜菜夜蛾细胞成系过程中发挥了重要作用。 在对甜菜夜蛾端粒酶的研究中发现,不仅在甜菜夜蛾幼虫的多种组织中高活性表达端粒酶,并且采用延伸(TTAGG)n端粒模式。该端粒酶全长2200bp,不含内含子,是昆虫家族中第一个获得的有活性的端粒酶基因序列。研究结果推翻了前人(Mizuko and Kenji, 2006)所述端粒酶GQ基团遗失是导致家蚕端粒酶活性丧失的可能原因的结论。甜菜夜蛾端粒酶基因序列的获得,为通过转基因的方法快速建立昆虫细胞系提供了方法和工具。