基因组编辑技术是近年来发展起来的一种针对特定DNA序列进行定点突变的方法。细菌中的分子免疫机制-clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)系统通过小RNA识别入侵的DNA(如噬菌体、质粒),并与核酸酶Cas蛋白形成复合体而沉默异源DNA。本研究利用化脓链球菌的II类CRISPR/Cas系统研究在植物基因组中产生定点突变的可能性,通过构建在植物中表达crRNA、tracrRNA二种单链RNA和二者串联的融合RNA,并与Cas9蛋白同时表达以研究1.该系统引起靶基因突变的精确性、效率及其产生的机制;2.通过表达只切割单链DNA的Cas9,探讨利用该系统进行DNA精确突变的可能性;通过研究,建立一种简单、精确和高效的新型植物基因组编辑技术体系。
英文主题词CRISPR/Cas;nickase;gene knock-in;GRATEN;