中文摘要：

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，因其基因突变致病的特性，特别适合基因治疗。自杀基因治疗是其目前基因治疗中非常有前景的一种策略。眼科领域的研究以单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因和丙氧鸟苷(GCV)系统较为普遍。HSV分为HSV1和HSV2，用于基因治疗的是HSV1－tk基因。超声（US）辐照微泡造影剂（UCA）进行基因转染能明显增强基因的转染效率，且具有安全、高效的特点。但单纯的微泡造影剂无组织特异性，基因转染率不高。如在微泡造影剂外壳连接上靶向配体，将极大提高超声介导基因转染的成功率。本课题拟制备能识别RB的靶向超声微泡造影剂，进行超声造影成像，为RB早期定性诊断提供新的方式；在此基础上制备携带HSV1－tk自杀基因的靶向超声微泡造影剂，注入体内后加以超声辐照，提高基因转染效率，为RB基因治疗提供新的手段。

结论摘要：

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是一种起源于视网膜核层原始干细胞的胚胎性恶性肿瘤，具有家族性和遗传性倾向。发病率在我国居眼内恶性肿瘤中的首位，并可引起全身转移和死亡。临床上眼球摘除术是最为经典和常用的治疗方式。患儿眼球和视功能完全丧失，给患儿和家人带来极大痛苦。放疗和化疗虽然对RB有一定疗效，但会引起放射性视网膜及视神经疾病，亦会引起第二种肿瘤，包括骨或软组织肉瘤，脑肿瘤及恶性黑色素瘤等。近年来基因诊断和治疗技术的兴起和不断发展，为RB的早期诊断和治疗带来了新的希望。超声靶向微泡破坏（ultrasound targeted microbubble destruction，UTMD)进行基因转染的方式较传统的转染方法如病毒，脂质体等具有细胞毒性小、更安全的特点，并且能明显增强基因的转染效率。超声微泡造影剂是一种血池造影剂，在临床应用广泛，非常安全，作为一种治疗性基因或药物的载体，在注入体内后，不加超声辐照则不能介导基因转染，加以一定剂量的超声辐照后，经辐照的区域才能发生基因转染，因此具有方便，易操作和控制的特点。但是单纯的超声微泡造影剂无组织特异性，在体循环维持的时间较短，基因转染率不高，如在微泡造影剂外壳连接上靶向配体，主动识别结合到肿瘤组织中，将较大的提高超声辐照微泡造影剂介导基因转染的成功率。本研究制备了能同时高效携带HSV1-tk基因和VEGFR抗体的靶向超声微泡造影剂，在体外实验中对培养的RB细胞进行试验，该靶向造影剂较声诺维转染效率更高，加入一定量的前体药物GCV后，该靶向造影剂较声诺维能更有效的抑制RB细胞的生长，抑制率达到（92.91±1.71）%。在体试验中，该靶向造影剂对裸鼠眼RB肿瘤的造影效果较声诺维更好，对肿瘤的显影时间更长，达15min。超声辐照携带HSV1-tk基因和VEGFR抗体的靶向造影剂较声诺维能更有效的促进HSV1-tk基因在RB肿瘤组织的表达。联合使用GCV后，显著提高了HSV1-tk/GCV系统对RB肿瘤组织的杀伤效应，肿瘤细胞凋亡率达（（90.47±2.25）%）。实验组裸鼠眼内RB肿瘤明显缩小，取得了良好的治疗效果。超声辐照携带HSV1-tk基因和VEGFR抗体的靶向超声微泡造影剂的方式简单易操作，安全有效可重复使用，有望为RB的基因转染和治疗提供一种安全有效的手段。