中文摘要：

T细胞免疫缺陷导致机体对恶性转化细胞监督不力，是白血病发生发展的重要原因，T细胞受体信号转导分子TCRζ表达下降或缺失严重影响T细胞的活化功能，本研究在既往系列研究白血病病人TCR谱系及信号通路相关基因表达特点等研究的基础上，拟进一步通过不同途径包括TCR ζ基因转导T细胞以及联合不同免疫刺激分子的诱导等方法恢复急性髓细胞白血病（AML）病人T细胞中TCR ζ链的表达水平，分析其功能变化，并通过基因表达芯片分析恢复TCR ζ链表达、活化前后T细胞的基因谱变化特点，进一步筛选和验证获得与之密切相关的基因，深入了解TCR ζ缺陷相关的分子机制，为TCR信号分子基因修饰T细胞提供一些新的资料，并为进一步开展靶向免疫治疗研究提供新数据和策略。

结论摘要：

本研究主要的目的是通过不同途径包括TCR ζ基因转导T细胞以及联合不同免疫刺激分子的诱导等方法恢复AML病人T细胞中TCR ζ链的表达水平，分析其功能变化，进而了解TCR ζ缺陷相关的分子机制。本研究自立项以来前后共收集了60例初发AML病人，根据所收集到外周血单个核细胞数的多寡进行不同的实验检测，目前已基本完成研究任务。本研究首先分析了AML病人T细胞信号通路中TCR ζ链及相关信号分子CD3-gamma,CD3-delta,CD3-epsilon等相关基因的表达水平情况，并对初发的AML病例CD3+/TCRζ+双阳性T细胞的表达情况进行分析，发现CD3+/TCRζ+双阳性细胞及各基因的表达水平均低于健康人，进一步分析发现TCR ζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平同样明显低于健康人，提示AML病人存在明显的T细胞免疫缺陷。通过利用已构建的TCRζ表达载体 (TCRζ-IRES2-EGFP)转导AML病人T细胞以及联合不同免疫刺激分子（IL-2, IL-7和IL-12）诱导AML病人T细胞均可在一定程度上上调并恢复TCRζ链RNA和蛋白水平及其相关基因的表达，蛋白定量芯片检测显示上调TCRζ链后可增强IL-2，IL-4、IFN-γ等细胞因子的分泌水平以及增强细胞毒性作用。在此基础上我们进一步对联合IL-7诱导前后T细胞TCR谱系进行克隆性分析，发现IL-7既能促进T细胞增殖，又不会改变T细胞的克隆性。本研究在针对AML病人T细胞研究的同时，还利用我们已建立的方法对CML、淋巴瘤和CLL等病人T细胞进行TCR ζ及相关基因的研究，同时在CML病人T细胞中实现了TCRζ基因转导和上调T细胞功能的作用。总之，本研究率先在国内外提供通过两种途径包括TCRζ基因转导和体外细胞因子诱导前后AML病人T细胞信号通路TCRζ链和相关基因的表达特点，及其T细胞的功能恢复情况，并为进一步了解AML病人T细胞信号通路相关分子免疫机制提供新资料，也为临床设计更简易有效T细胞免疫治疗治疗策略提供参考资料和依据。本课题经过3年实施，已经完成了研究任务，部分前期的研究成果已经发表论文7篇，其中SCI收录5篇，学位论文2本，本项目同时协助培养博士研究生和硕士研究生各一名。主要的研究成果参加国际学术会议交流论文2篇，主要研究成果尚在总结和撰写多篇论文。