中文摘要：

急性胰腺炎(AP)发病率逐年上升，病死率仍居高不下，发生机理欠清。AP的严重程度与腺泡细胞的凋亡/坏死相关，干预细胞凋亡与坏死将影响胰腺炎性损伤程度。然而，决定AP凋亡与坏死取向，以及由轻症向重症胰腺炎转化的机制不明。基于前期的研究TRAF6是凋亡与坏死信号通路的关键交联蛋白，TRAF6可能在急性胰腺炎中起重要的保护作用，提出TRAF6介导的凋亡/坏死信号通路可能参与AP中以凋亡-坏死为特点的这个炎性病理过程。本课题以TRAF6介导的凋亡与坏死双重作用为切入点，基于活体、离体研究平台，构建轻症与重症AP模型，观察胰腺、小肠、肺等组织凋亡与坏死相关基因变化以及炎症扩散时炎症因子动态变化规律；并应用基因表达沉默及转染技术，对胰腺腺泡细胞等相关细胞的TRAF6介导的信号通路进行特异性抑制及过表达调控研究，结果可对探索新的抗炎机制，调控AP提供依据。

结论摘要：

急性胰腺炎（AP）发病率高，发病机理欠清。AP的严重程度与腺泡细胞的凋亡/坏死相关，干预细胞凋亡与坏死将影响胰腺炎症转归。基于前期的研究，TRAF6是凋亡与坏死信号的关键交联蛋白。为进一步探讨TRAF6在胰腺炎症进展中的具体作用，本项目从TRAF6介导的凋亡与坏死双重作用为切入点，基于活体、离体研究平台，构建轻症与重症AP模型，应用基因表达沉默及转染技术，对胰腺腺泡细胞等相关细胞的TRAF6介导的信号通路进行特异性抑制及过表达调控研究。结果发现①通过对传统AP模型的改良，获得了较为理想的不同炎症程度的急性胰腺炎模型，即急性水肿型胰腺炎（AEP）和急性坏死型胰腺炎（ANP）模型。结果发现TRAF6在AEP组中明显升高，相反却在ANP中表达明显受到抑制。体外机制研究发现，TRAF6在AEP过程中通过抑制细胞凋亡起保护作用。②分别用不同浓度的雨蛙素（caerulein，0.5~6μM）和脂多糖（LPS，0.25~4μM）诱导小鼠胰腺腺泡细胞266-6细胞株发现当用caerulein诱导的时候，TRAF6随着浓度梯度的增加而升高；而用LPS诱导的时候，LPS浓度低于0.5时TRAF6的表达随浓度的升高而升高，而浓度高于1时，TRAF6的表达明显受到抑制。说明，不同浓度的LPS诱导AP时，TRAF6的作用是不一致的。③在炎症信号传导过程中，SOCS蛋白家族起重要的抑制作用。用LPS诱导266-6细胞株发现，SOCS家族蛋白中，CIS、SOCS1、SOCS3和SOCS4都有表达，但只有SOCS1、SOCS3是明显变化的，随着LPS浓度的增加而表达明显升高。在原代培养的腺泡细胞中也得到证实。只是在TLR4基因敲除的小鼠腺泡细胞里面，SOCS1和SOCS3表达无明显变化。④进一步探讨SOCS与TRAF6关系发现，过表达SOCS1、SOCS3均呈剂量依赖的抑制TRAF6的表达。免疫共沉淀发现，SOCS1、SOCS3结合TRAF6蛋白，通过促进TRAF6的过度泛素化，导致TRAF6的降解。在TLR4基因敲除的小鼠腺泡细胞，LPS对TRAF6、SOCS1和SOCS3表达无影响。结果证明，TRAF6在急性胰腺炎症进程中通过抑制凋亡起保护性的作用，LPS诱导SOCS1和SOCS3加重了轻型胰腺炎向重型胰腺炎进程。