昆虫中肠细胞具有消化、吸收和分泌等重要生理功能,同时是生物杀虫剂如苏云金芽孢杆菌(Bt)、昆虫杆状病毒等的作用靶标。在活体内,由于中肠结构和各因素之间的复杂性使得中肠生理学、病理学和毒理学的研究变得困难,而离体细胞培养为研究中肠细胞的功能提供了简单、快速和准确的手段,为病原和寄主相互关系的研究提供了理想的途径。目前,国际上对昆虫中肠细胞的离体培养还局限于原代培养,尚缺少可用的传代中肠细胞系。本项目拟通过改进的酶解法分离昆虫中肠细胞,进行原代培养,筛选适合的生长因子,设计改进培养基配方,通过转SV-40基因诱导细胞的转化,继而建立可连续传代的中肠细胞系,通过形态、生化和分子生物学的方法鉴定细胞系,并阐明细胞系的生物学特性。该研究将为中肠生物学的各项研究提供离体的模式系统和新途径,具有重要的理论意义和应用价值。
midgut epithelium;growth factor;cell line;biological characteristics;Bombyx mori
昆虫中肠细胞具有消化、吸收和分泌等重要生理功能,在活体内,由于中肠结构和各因素之间的复杂性使得中肠生理学、病理学和毒理学的研究变得困难,而离体细胞培养为研究中肠细胞的功能提供了简单、快速和准确的手段,为病原和寄主相互关系的研究提供了理想的途径。目前,国际上对昆虫中肠细胞的离体培养还局限于原代培养,尚缺少可用的传代中肠细胞系,亟待解决。该项目通过筛选中肠细胞的分离方法,对昆虫中肠细胞进行离体培养,通过设计和改进中肠细胞的培养基配方,建立可连续传代的中肠细胞系,通过形态和分子生物学手段鉴定中肠细胞系,并阐明细胞系的生物学特性。该项目按任务书的计划内容进行,未进行大的调整,基本完成了预期的目标。取得的成果主要包括(1)筛选获得了适合离体培养的中肠细胞分离方法和培养条件;(2)成功建立了一株家蚕中肠细胞系Bm-Mg-1,并明确了离体条件下对家蚕核型多角体病毒的敏感性以及分泌碱性磷酸酶等生物学特性;(3)在国内外科技期刊上发表论文3篇,其中SCI收录1篇;(4)申报国家发明专利2项,其中1项获得授权;(5)培养硕士研究生2人。该项目将为昆虫中肠生物学功能的研究提供离体的模式系统和新途径,具有重要的理论和应用价值。