中文摘要：

PCR扩增了一个长2160bp的基因片断，序列分析表明其覆盖了完整编码框，编码由698个氨基酸组成的人转铁蛋白。PCR扩增了一个长约1.1kb的包含Sca I酶切位点的TfN基因片断，插入pPICZα的Pml I和Xba I酶切位点，成功获得重组子pPICZα-TfN，测序结果表明通用型转铁蛋白融合表达载体构建成功。通过设计引物、PCR、酶切连接成功构建了pPIC-vMIP-TfN质粒,序列分析表明表达框正确。构建好的pPIC-vMIP-TfN质粒用SacI线性化，转化酵母，得到含有vMIP-TfN片段的酵母工程菌。工程菌经甲醇诱导表达出vMIP-TfN融合蛋白，经硫酸铵沉淀、透析、亲和层析得到纯度较高的vMIP-TfN融合蛋白。实验表明vMIP-TfN融合蛋白具有趋化抑制活性；vMIP-TfN融合蛋白在血浆中24h内有着良好的稳定性。200ug/ml vMIP-TfN蛋白从AP端到BL端和从BL端到AP端的Papp值分别为5.32×10-6cm/s, 6.95×10-6cm/s，说明vMIP-TfN融合蛋白在Caco-2细胞肠吸收模型中的转运机制主要为被动扩散。