可溶性血管紧张素转化酶2(ACE2)是SARS冠状病毒的功能性受体,ACE2在多种组织如心、肾等均有分布,但SARS病毒却没有侵犯心、肾的报道,可能肺组织中还有其它特异伴侣受体参与SARS病毒的感染,已有研究表明Caveolae/Caveolin在介导细胞内外大分子物质转运(胞饮/胞吐)、参与信号传导和病毒感染等方面起着非常重要的作用。我们推测这种伴侣受体应该是肺组织特异性并存在于Caveolae (小凹)内与Caveolin-1脚手架域偶联,因此在一般情况下表现为失活状态,当血浆型血管紧张素转化酶2(ACE2)与SARS冠状病毒结合后,引起SARS病毒S蛋白结构改变与Caveolin-1脚手架域识别的一致序列暴露并优势结合,从而使这种特异能介导胞吞的受体由失活状态被激活从而将SARS病毒内吞。准备构建Caveolin-1、ACE2各种突变体寻找SARS病毒的新型伴侣受体为防治提供新思路
用硫化修饰引物结合Pfu校正聚合酶的高精度RT-PCR方法,在同样退火温度下、扩增了人胎肝中的12个未知功能新蛋白基因的全长cDNA,测序鉴定后,克隆入Invitrogen 公司的pcDNA3.1-GFP表达载体,用脂质体介导分别转染入HepG2细胞,荧光显微镜观察GFP融合蛋白亚细胞定位;通过Werstern-blot法、间接免疫荧光法比较重组蛋白与内源表达蛋白活性与亚细胞定位差别。用Real-time荧光定量PCR法比较其基因表达丰度差异。结果发现,用获得的caveolin-1基因3种不同功能域突变体转染HepG2细胞后,其中全长caveolin-1和缺失脂质结合域突变体过表达HepG2细胞可见细胞固缩,体积变小,密度增加,染色质浓缩聚集于核膜下,呈境界分明的块状或新月形小体。MTT法和流式细胞术检测初步确定这种基因的不同功能域突变体蛋白有不同的功能,其中两种有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用,而缺失81-101氨基酸骨架信号域的caveolin-1突变体有明显促进肿瘤细胞生长作用。