位置:立项数据库 > 立项详情页
短双链RNA介导的RNA干扰对柯萨奇病毒细胞内清除作用研究
  • 项目名称:短双链RNA介导的RNA干扰对柯萨奇病毒细胞内清除作用研究
  • 项目类别:面上项目
  • 批准号:30371343
  • 申请代码:H1005
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2004-01-01-2006-12-31
  • 项目负责人:刘哲伟
  • 负责人职称:研究员
  • 依托单位:首都儿科研究所
  • 批准年度:2003
中文摘要:

该研究利用RNA干扰技术(RNA interference)以柯萨奇病毒感染传代细胞和原代心肌培养细胞为研究对象较系统的观察短双链RNA介导的RNA干扰对病毒的免疫清除作用。根据CVB3基因组序列特点,合理设计SiRNA。观察SiRNA在细胞内对病毒毒力的抑制和在病毒感染量化的基础上,得到SiRNA对病毒的清除率和清除时间。对病毒蛋白表达和RNA产生抑制程度。对细胞克隆化以对残留病毒程度和再增殖的观察。探讨在细胞中SiRNA抑制病毒的作用途径,将验证和鉴别SiRNA的作用不同于长双链RNA激活的干扰素和酶的作用,而直接特异性的降解病毒靶基因的证据。研究SiRNA抑制靶mRNA序列特异性的、剂量与抗病毒效果之间关系、SiRNA在细胞内代谢曲线和毒性实验。本研究拟估价SiRNA的技术在治疗病毒性感染的可能性,并提供较完整的抗病毒数据和研究资料,为开辟治疗病毒感性疾病的新途径奠定基础。

结论摘要:

系统研究了短双链RNA介导的RNA干扰技术在传代细胞和小鼠心肌细胞上对柯萨奇病毒(CVB3)感染的抑制作用、特性及其作用机制,获得完整的研究结果。阐明该技术抑制CVB感染的可能性,为进一步探索治疗病毒性疾病的新途径提供重要研究资料。主要成果包括一、在HeLa细胞上筛选出有抑制病毒复制作用的siRNA,其中siRNA3753对CVB3 感染72h后致细胞病变、病毒滴度、 病毒蛋白表达和基因复制水平的抑制率达到95%。二、获得较全面的siRNA抑制病毒感染作用特点研究资料,包括抗CVB感染的量效和时效关系;siRNA转染效率、存留时间及对重组基因特异性降解作用;经siRNA处理病毒感染细胞的培养上清有限稀释后再感染数据;细胞毒性实验等研究结果,是目前在siRNA抗同一病毒感染作用的研究中最全面且最深入的。三、siRNA3753在培养的心肌细胞中同样显示对CVB3复制的抑制作用和保护心肌细胞簇搏动、心肌细胞生长良好状态。电转方法对病毒抑制率可以达到95%以上,脂质体为78.2%。四、获得siRNA作用机制的初步结果,阐明siRNA直接降解病毒基因,而不是通过激活PKR或干扰素途径来完成。


成果综合统计
成果类型
数量
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利
  • 获奖
  • 著作
  • 3
  • 1
  • 0
  • 0
  • 0
相关项目
期刊论文 22 会议论文 9 获奖 2
期刊论文 6 会议论文 1 获奖 1
刘哲伟的项目