中文摘要：

FGF/FGFR3与p38 MAPK均在软骨生成中发挥重要作用，但FGF/FGFR3能否激活TAK1-p38 MAPK，并参与FGFR3介导的软骨发育异常尚不清楚。我们发现，FGF-2处理后TAK1磷酸化水平增加，FGFR3与TAK1之间存在相互作用，SB203580可以缓解FGFR3突变所致的骨骼异常。为研究相关机制，本课题拟通过建立软骨特异敲除FGFR3、TAK1和p38α和敲除TAK1或p38α基因的ACH小鼠，通过分析小鼠骨骼发育情况，结合原代胚胎跖骨和软骨细胞分离培养和免疫共沉淀等技术，研究FGF/FGFR3激活TAK1-p38 MAPK信号通路的分子机制，并研究该通路在FGFR3功能增强所致骨骼发育异常中的作用和机制。通过本研究，希望明确FGF/FGFR3激活p38 MAPK通路的分子机制，阐明TAK1-p38 MAPK信号通路在FGFR3功能增强所致的软骨发育不全中的作用。

结论摘要：

申报的自然基金“FGFR3-TAK1-p38 MAPK 信号通路在软骨生成中的作用及其机制研究”由一个4年期的面上项目改为1年期的小额资助项目，调整后我们研究工作主要集中在“FGF/FGFR3激活TAK1-MKK3/6-p38 MAPK通路的分子生物学机制”上面。经过一年的工作，我们工作的研究进展主要包括利用TAK1抑制剂（5Z-7-Oxozeaenol）处理后FGF-2激活的p38 MAPK 、p-MKK3/6、p-TAK1（S412）明显降低，萤火虫荧光素酶报告基因结果也证实，抑制TAK1活性，可以明显抑制RCS细胞中FGF-2激活的pFA-CHOP-Luc活性；FGF-2促进TAK1的磷酸化（p-TAK1-S412增加)；同时我们的研究结果显示，FGF-2促进TAK1的泛素化（K63 的泛素化）；IP的研究结果显示，FGFR3与TAK1之间存在相互作用（不论是转染细胞还是内源细胞均得到相应结果）；Mapping的结果显示，FGFR3通过KD domain与TAK1相互作用；同时在试验中我们发现，FGFR3与TAB1作用，但不与TAB2之间存在相互作用。利用体外跖骨培养系统，我们发现p 38 MAPK信号通路特异阻断剂SB203580可以明显缓解FGFR3突变所致的骨骼发育异常 E18.5的胚胎期TDII小鼠（EIIa-Cre;Fgfr3K644E/+，FGFR3K644E突变持续激活）(以同窝野生型小鼠为对照)双侧下肢中间跖骨，置于48孔板中培养，部分样本加入SB203580处理，培养的0d、7d ，趾骨于IPP7.0软件控制的CCD下测量长度并分析。结果显示SB203580处理后FGFR3所致的骨骼生长抑制明显缓解，并且这种作用与FGFR3的激活明显相关。另外，我们引进了TAK1flox/flox 小鼠，目前该小鼠正在与FGFR3功能增强型的小鼠ACH（模拟人侏儒）进行交配，我们希望通过获得在软骨细胞中特异敲除TAK1基因的ACH小鼠并分析其表型，明确FGFR3-TAK1-p38 MAPK 信号通路及其在软骨发育分化中的作用和机制。