中文摘要：

在总结前人与自身工作基础上，我们假设在相同的细胞内若干基因发生相同区域去甲基化，不会偶然、孤立存在，还可能影响其他多种重要基因发生类似改变。为此，拟在确诊子宫腺肌病异位子宫内膜组织中，分离其内膜间质细胞，确认存在14-3-3ζ等基因启动子区域去甲基化及特征性生物学功能改变后，采用蛋白质组学技术，筛选与鉴定差异表达之蛋白，绘制相应MAP图；选择一个典型差异性高表达，非14-3-3ζ、SF1受体与ER-β受体且其基因相同区域存在去甲基化蛋白X，采用RNAi腺病毒载体技术，建立相应pSilencer-X细胞株；检测其细胞增殖率、迁移率、细胞周期及凋亡情况；将相应的母本细胞及转基因细胞，分别接种至人工控制周期的裸鼠背部，观察接种细胞的生长、增殖与浸润情况，以求阐明差异性高表达蛋白X在子宫腺肌病组织间质细胞中的意义，为深入了解子宫腺肌病发生、发展过程的分子生物学机制，奠定良好的理论与实验基础。

结论摘要：

子宫腺肌病主要发生于育龄妇女，且经产妇多见。近年来国内外文献报道其发病率有明显上升趋势，已成为人们日益重视的妇科常见病、多发病。其发病机制复杂，学说甚多，至今未成定论。课题组总结、分析前人工作，并结合自身前期工作基础，在发现确诊子宫腺肌病临床病理组织中，14-3-3ζ亚型mRNA与蛋白显著上调，其基因启动子区CpG岛存在去甲基化状态。本项目分离纯化、培养了子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞（ESCs），RT-PCR及WB验证14-3-3ζ、SF1、ER-β的mRNA及蛋白表达，MSP验证三者的启动子区甲基化状态；二维蛋白电泳及质谱检测子宫腺肌病异位ESCs中的差异表达蛋白；选取3-5个典型高表达的蛋白在间质细胞中验证，RT-PCR及WB验证其 mRNA及蛋白表达水平，飞行时间质谱检测其基因启动子区甲基化情况；采用基因克隆及转基因技术，建立相应的转基因细胞，分别检测其细胞增殖率、迁移率、细胞凋亡及周期情况。将相应的母本细胞及转基因细胞，分别异位接种至人工控制生理周期的裸鼠背部皮下，观察接种细胞的生长、增殖等情况。结果发现1）在临床确诊子宫腺肌病病理组织中分离纯化、培养的子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞（ESCs），RT-PCR及WB检测到14-3-3ζ、SF1、ER-β的mRNA及蛋白表达均上调，MSP检测到三者的启动子区均存在去甲基化状态；2）二维蛋白电泳及质谱检测到差异表达蛋白32个，其中子宫腺肌症间质细胞中表达上调点19个，表达下调点7个，仅在子宫腺肌症间质细胞中表达点4个，缺失点2个；3）选取典型高表达的蛋白PDRX4、TGM2及LASP1在间质细胞中验证，RT-PCR及WB发现在异位子宫内膜间质细胞中PDRX4、LASP1 mRNA及蛋白表达水平显著上调，TGM2 mRNA及蛋白表达水平显著下调，飞行时间质谱检测结果显示在异位子宫内膜间质细胞中LASP1基因启动子区存在异常去甲基化情况；4）检测到LASP1转基因细胞ESCs的增殖率及迁移率要显著低于对照ESCs，细胞凋亡情况显著高于对照ESCs；5）裸鼠皮下接种4周后，监测接种组织生长情况，结果表明 LASP1转基因细胞来源组织体积较对照转基因细胞来源组织体积更小。本课题基本完成预期研究计划，培养硕士生3名，研究成果正在整理发表中。