中文摘要：

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)是近年来新发现的一种严重危害我国婴儿健康的遗传代谢性肝病，其确诊依赖SLC25A13基因分析。SLC25A13突变具有明显的异质性，其种族和地区分布的差异性也比较突出，因此识别我国人群SLC25A13新突变并建立低成本、高通量和高灵敏度特异度的突变检测方法至关重要。本研究以课题组多年NICCD诊断治疗和SLC25A13突变分析工作为基础，应用DNA直接测序、LA-PCR、定量PCR和家系SNP分析等技术识别NICCD患者SLC25A13新突变，建立分子诊断方法并应用于后续突变筛查。然后探索应用高分辨率溶解分析法(HRMA法)进行SLC25A13基因分型和突变筛查的实验条件，并深入研究SLC25A13基因型与NICCD表现型的相关性。本项目可为加深对NICCD实验室特征的科学认识补充新资料、提供新方法，具有重要科学意义和学术价值。

结论摘要：

在国家自然科学基金资助项目81070279支持下，课题组应用DNA直接测序、LA-PCR、cDNA克隆和家系SNP分析等技术，确诊NICCD患者168例，其中含马来西亚患者4人；发现SLC25A13基因新突变18种(V411M, G283X, c.2T>C, c.754G>A, D350N, R355G, G139R, R455L, Y24X, c.R355Q, c.265delG, IVS4ins6kb, K405N, c.845_c.848+1delG, Q592P, V264I, V474M和M35V)；首次在人外周血淋巴细胞中发现新的mRNA剪接变异体26种，并在NICCD患者中发现致病mRNA分子两种（r.16_212dup和r.329_468del）。应用高分辨熔解分析法(HRMA)研究了广东人群中高频突变851_854del, IVS6+5G>A, 1638_1660dup, IVS16ins3kb和 g.1399C>T的分布特征，发现珠三角外围地区人群上述突变携带率高于珠三角(1/4400 vs 1/14400，卡方值=4.639，P<0.05)，广东人群Citrin缺陷病理论患病率为1/8800，根据Hardy-Weinberg 定律计算，广东省至少存在本病患者11800人。在SLC25A13基因型研究的基础上，对NICCD患者胆汁淤积、蛋白、脂类、酶学及金属离子等生化指标的改变特点做了深入分析，发现上述生化表型指标与SLC25A13基因型之间不存在具有统计学意义的相关性。总之，本课题研究为广东人群Citrin缺陷病危害评估提供了初步的分子流行病学数据，丰富了SLC25A13基因突变谱，深化了对NICCD实验室特征(包括SLC25转录产物结构特征)的科学认识，从而圆满完成了项目研究任务。