中文摘要：

目前国内外对胰腺癌的早期诊断与治疗进展缓慢，缺乏有效的诊断及治疗药物，该病5年生存率小于5%。可视化肿瘤靶向给药系统集诊断、治疗及疗效的实时监测为一体，为胰腺癌的早期诊断及个体化治疗提供了新途径。本项目以胰腺癌细胞特异表达的间皮素（MSLN）单克隆抗体为靶向配体，利用阳离子隐形纳米脂质体制备技术，通过氧化USPIO外层葡聚糖羟基形成醛基，在碱性条件下与含有氨基的磷脂形成暂时性可逆性C=N双键，采用逆向蒸发法制备具有MR成像功能的、高包封率的USPIO免疫长循环阳离子脂质体载体，并通过与DNA复合开展制剂学研究，旨在构建具有高效基因转染效率、高度胰腺癌靶向、及MRI体内成像的基因传递系统，并且通过构建及转染具有胰腺癌细胞高度特异性的、含有MSLN启动子及白喉毒素A片段的重组质粒DNA，考察所构建载体系统对胰腺癌的可视化治疗效果，进行动物体内外药效评价。

结论摘要：

项目研究目标是构建胰腺癌靶向、诊治一体的可视化脂质体基因载体系统，有效基因转染的同时，实现MR成像观测。目前，基本实现了预期目标，完成内容包括1.成功构建了间皮素抗体表面修饰，包封USPIO的长循环纳米阳离子脂质体载体（M-USPIO-CL）,确定了基本处方及制备工艺，即采用DOPE/DC-chol/SPC-3阳离子体系，采用逆向蒸发法，通过氧化USPIO外层葡聚糖形成醛基，与氨基磷脂DOPE形成暂时性键合的方法，提高USPIO的包封率，EE%由10%提高至40.8%，该方法已获国家发明专利授权（ZL201210016124.X）。纳米表征M-USPIO-CL稳定，粒径约180nm，zeta电位28mV，TEM观察为圆形，且大量USPIO被成功包封入脂质体内。2.建立了后插入法偶联MLSN单克隆抗体方法，电泳及共聚焦实验验证了抗体连接后的完整性和靶向性。3.将M-USPIO-CL与DNA复合进行纳米表征，当DC-Chol/DNA以质量比7-9:1复合时，粒径较小，DNA包封率较高。4. 考察M-USPIO-CL体外MR成像功能，SI随铁浓度升高而降低，计算M-USPIO-CL和USPIO的弛豫度分别为0.0572和0.0578 mM-1ms-1，M-USPIO-CL的弛豫度未显著改变，具有较好MR成像功能。5.以PANC-1细胞为模型，MTT法考察M-USPIO-CL/DNA复合物的毒性，证实毒性主要来源于DC-Chol，随DC-Chol/DNA比例增高，毒性增大。采用报告基因质粒pGPH1/GFP/Neo，考察基因转染功能，证实对panc-1细胞具有转染功能，且当DC-chol/DNA质量比为3:1时，转染效率最高。6.构建人MSLN启动子控制表达的质粒pMSLN/luc和pMSLN/DT-A，并验证了功能。7.采用panc-1细胞移植瘤模型考察动物体内MR成像功能及基因治疗效果，静注4h后，肿瘤部位SI显著降低，ΔSI 显著低于USPIO组；给药3周后，与生理盐水组比，基因治疗组呈现显著肿瘤抑制效果。综上所述，该项目成功构建了胰腺癌靶向诊治一体化纳米基因载体，并在细胞和动物水平验证了转染pMSLN/DT-A疗效，为胰腺癌早期诊断与生物治疗提供新途径。成果共发表SCI论文6篇，总IF23.34分，获得一项专利授权，培养2名硕士研究生，完成1篇硕士学位论文。