中文摘要：

肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对调节免疫细胞如树突状细胞（DC）及部分非免疫细胞的成熟、激活与炎症反应起关键性作用。本研究拟采用RNA干扰技术，阻断TRAF6介导的供体DC成熟，以不成熟供体DC诱导移植肾免疫耐受。本项目按计划建立了小鼠骨髓细胞的分离与培养技术，以GM-CSF诱导骨髓细胞分化为树突细胞；构建携带TRAF6基因干扰序列模板的沉默质粒；选择小鼠巨噬细胞株RAW264.7筛选出有效TRAF6干扰序列，发现TRAF6基因敲低对LPS作用下RAW264.7表达的Caspase3蛋白水平升高及伴随的细胞凋亡有抑制作用；但对RAW264.7表达共刺激分子无显著影响。由于培养与分化所获树突细胞数量少，且质粒载体转染效率低，难以获得TRAF6基因敲低的不成熟DC，项目研究方向作了调整。直接在体外以siRNA转染原代肾小管上皮细胞，探讨TRAF6基因敲低对肾小管上皮细胞炎症与损伤的保护作用，体外实验发现siTRAF6对肾小管上皮细胞炎症与凋亡有保护作用，为进一步应用siTRAF6保护移植肾的在体研究作了必要的准备。