本项目对在前一项目中发现的与BRS-3 相互作用的新基因蛋白的超分子组装在应激信号传递中的定位和作用进行研究。我们将新基因命名为蛙皮素受体作用蛋白(bombesin receptor activating protein,BRAP)。结果发现⑴对BRAP的生物信息学分析提示BRAP具有信号分子特性;⑵通过构建荧光表达载体,发现BRAP亚细胞定位于胞膜和胞浆;⑶制备BRAP抗体,应用免疫组化和Real-time PCR观察BRAP及编码蛋白在臭氧应激诱导的气道高反应动物模型(应激0,2,4,8 天)中的时空分布。⑷构建稳定转染的BRAP高表达和沉默的支气管上皮细胞(BEC)株,观察了BRAP对BEC功能的影响,结果发现BRAP可促进BEC细胞分裂周期,提高损伤修复能力,抑制BEC抗原提呈的能力。目前正在收集应激不同时间的BEC,应用免疫共沉淀技术及荧光能量共振转移技术检测BRAP与BRS-3 的相互作用以及细胞信号分子对其相互作用的影响等;应用酵母双杂交筛选BRAP相互作用蛋白;免疫共沉淀、质谱分析和多重荧光技术证实超分子组装成分和空间定位。
英文主题词bronchial epithelial cells;stress;bombesin subtype 3;signal supramolecules pkg