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中文摘要：
本课题在现有研究的工作基础上欲设计制备一系列同位素标记固相试剂，进行试剂的筛选和研究方法的建立完善，并将其应用于基于质谱的蛋白差异表达分析研究中。此类同位素标记固相试剂的制备可以利用肽固相合成方法来完成，试剂中的活性基团为碘乙酰基，选择性地与肽段中半胱氨酸的巯基侧链共价结合，达到标记肽段与未标记肽段的有效分离，在后续的MS/MS分析研究中标记部分分子量较小便于数据库搜索，在肽段标记过程中反应所要求的溶液条件与蛋白酶解缓冲溶液保持一致，标记肽段的回收在较温和的条件下完成并获得较好回收率，有效克服ICAT、ALICE试剂和含碘玻璃珠试剂的弊端。建立完善此类试剂的应用方法并将其应用于正常与病态细胞中蛋白差异表达分析中，将为找到直接与特定生理或病理状态相关的分子提供科学依据，进一步为设计作用于特定靶分子的药物奠定基础。
结论摘要：
本课题在现有研究的工作基础上制备了一系列同位素标记固相试剂，并进行了试剂的筛选和研究方法的建立完善，并将其应用于基于质谱的蛋白差异表达分析研究中。同时开发了一种新的蛋白质修饰试剂，4,6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶，对溶菌酶的修饰不会导致酶活明显的下降，通过调整修饰反应中缓冲溶液的pH值，还可以实现4,6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶对蛋白质及多肽的特异性修饰，成功地在基于MALDI-TOF MS的半胱氨酸、含半胱氨酸的多肽及蛋白质的定性、定量和比较分析中应用。并设计了一种新的基于稳定同位素标记的蛋白定量分析策略，并且考察了修饰对酶解反应的影响。在新的策略中，将蛋白分别用"重"、"轻"修饰试剂标记以后混合，再进行酶解及质谱分析。将修饰反应提前有如下优点被修饰的对象是蛋白，降低了反应体系的复杂程度，有利于监测反应的进程；修饰以后被分析样品可以混合再进行后续的实验操作，最大限度的降低了操作带来的误差。建立完善此类试剂的应用方法并将其应用于正常与病态细胞中蛋白差异表达分析中，将为找到直接与特定生理或病理状态相关的分子提供科学依据，进一步为设计作用于特定靶分子的药物奠定基础。
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