中文摘要：

血管内皮细胞(EC)损伤是动脉粥样硬化(As)病变发生的始动因素，保护EC免受损伤是防治As发生发展的关键。对氧磷酯酶1(paraoxonase 1，PON1)是人血清高密度脂蛋白(HDL)中的一种连接蛋白，不在血管EC中表达。本研究通过构建目标PON1基因腺病毒载体，探讨PON1对ox-LDL诱发的EC损伤是否具有保护作用及其可能的作用机制。为此，首先通过预实验中获得的PON1基因启动子区和编码区基因多态性与PON1活性关系结果，确定待克隆的PON1 cDNA,构建PON1基因腺病毒载体并转染人脐静脉EC，并以其对应的血清来源的HDL对人脐静脉EC生长作用的结果相比较，观察PON1对ox-LDL诱发的EC损伤是否具有保护作用；通过检测胞浆内与ox-LDL诱发相关的上调蛋白的表达变化，探索此保护作用的分子机制。本研究有助于建立PON1保护EC损伤而防治As的理论基础。

结论摘要：

对氧磷酯酶1(paraoxonase 1，PON1)是人血清高密度脂蛋白的一种结合蛋白，对它生物学性质的认识从水解神经毒试剂转移到其抗动脉粥样硬化(As)作用，但分子机制不清，一个重要的原因是至今还未发现该酶抗脂质氧化的特异性生理性底物。此外，检测PON1活性所应用的底物是有毒的，从而限制了酶活性的临床实验室应用。本研究分三部分1. 建立一个体外表达和纯化PON1的方法，结晶蛋白，通过结构与功能的关系推测可能的生理性底物，在此基础上建立一个稳定、特异、和灵敏度高的该酶活性检测方法，但是因为PON1表达后在包涵体内，为纯化带来了困难，至今没有得到高表达的蛋白；2. 建立一种基于特异性微球的多基因型检测方法，为研究PON1基因型和活性的关系打基础。这部分工作进展顺利，方法学的文章已经被CCLM接受。进一步的工作还会重点放在第一项工作上，以期获得高表达的蛋白，进一步纯化，结晶，为研究结构与功能的关系建立基础。此外，我们还将利用AdEasyTM Adenoviral Vector System(Stratagene)，构建腺病毒介导的PON1载体，为研究PON1对内皮细胞的保护作用建立基础。