中文摘要：

干眼病是自身免疫介导的炎症疾病，严重影响患者视功能，Th17细胞是干眼病主要的病理性效应细胞。Treg细胞具有抑制Th17细胞，调节炎症和免疫等作用。目前Treg细胞在干眼病免疫发病中作用和机制有待进一步阐明。已有研究证实C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠是干眼病（Sj?gren's 综合症）的理想模型。目前该模型的角膜、结膜上皮炎症损害和机制有待研究。本项目拟在高渗透压培养的人角膜和结膜上皮细胞及该小鼠模型上，采用ELISA、Western blot、RT-PCR、流式细胞分析等方法，研究小鼠结膜上皮下及颌下淋巴结、颈浅淋巴结内Th17细胞的诱导分化，Treg细胞的数量、增殖能力、对Th17细胞抑制能力的变化和机制，Th17细胞分泌的IL-17在角膜和结膜上皮细胞炎性因子产生中的作用、信号通路和对粘蛋白分泌的影响。以期阐明Th17和Treg细胞在干眼病免疫发病中的作用和机制。

结论摘要：

干眼病是最常见的眼表疾病，Th17细胞和Treg细胞在干眼病免疫发病中的机制有待进一步阐明。C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠（为C57BL/6小鼠和NOD小鼠进行异种杂交多代筛选的纯和子小鼠）是干眼病的动物模型。本项目拟通过病理染色、免疫组化、PCR、WB等研究方法，对各个周龄（第4、8、12、16、20周龄）的C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠（实验组）和C57BL/6小鼠（对照组）的眼表相关组织进行研究，以阐明Th17细胞和Treg细胞在干眼病免疫发病中的作用和机制。本研究首先采用泪液分泌量检测、眼表染色、病理染色及扫描电子显微镜检测的方法，发现实验组小鼠在出生后第4-20周龄内，其空腹血糖值未受损；可自发地产生干眼，且随着周龄增加，其干眼逐渐加重，泪腺组织中淋巴细胞浸润逐渐增多，且雌性小鼠的干眼病体征均较同周龄的雄性小鼠严重。由以上结果，我们认为泪腺组织中的炎症可能为C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠发生干眼症的原因。因此，我们通过免疫组化和RT-PCR检测了小鼠的泪腺组织中IL-17（Th17细胞主要分泌的炎症因子）的表达量，结果显示，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠泪腺组织内IL-17的表达在第16周龄时达到高峰，提示炎症细胞的表达增多可能参与了眼表组织的破坏。故我们向小鼠腹腔内注射IL-17抗体后，再进行干眼病各项指标的检测，研究结果发现，阻断IL-17后，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠干眼病体征减轻，泪腺组织淋巴细胞浸润数目减少。而实验中C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠泪腺组织Foxp3+的表达随周龄增加而逐渐增多，即小鼠泪腺组织内Treg细胞的数量并未减少，反而增多，提示其在实验组小鼠泪腺组织中，Treg细胞对效应性T细胞（Th17细胞）的抑制能力可能减弱所致。干眼病患者的泪液渗透压显著升高，本研究还采用高渗盐水和等渗盐水点眼制作干眼模型，发现高渗盐水点眼后可诱发干眼，且使用左卡尼汀滴眼后，可明显缓解干眼病。这为后期进行干眼病小鼠角膜、结膜上皮的体外培养及体外实验提供了一个参考的渗透压指标。本研究结果认为，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠是干眼病较好的动物模型，其泪泪腺组织中IL-17的增多及Treg细胞功能的下降导致的炎症可能症可能为该小鼠发生干眼病的主要机制