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Exendin-4类似物的克隆、表达与体内生物活性检测
  • ISSN号:1000-3061
  • 期刊名称:《生物工程学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室,江苏南京210009
  • 相关基金:国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2202AA217031-2),国家自然科学基金(No.30270298),江苏省自然科学基金(Nos.BK95092309,BG2001011),国家基础科学人才培养基金(No.J0630858)资助.
中文摘要:

为研究Exendin-4类似物的克隆,融合表达及在体内的生物活性,在pED载体融合伴侣序列中插入利于下游分离纯化的序列成为5#载体,将Exendin-4类似物基因与5#载体中的融合伴侣基因通过酸水解位点连接,转化至E.coliBL2l中并诱导表达融合蛋白,酸水解将目的肽与融合伴侣分开后,经阴离子交换树脂分离得到目的肽。6周~8周正常雄性ICR小鼠皮下注射Exendin-4类似物后,口服糖耐量实验检测在不同时间段小鼠血液中葡萄糖及胰岛素含量的变化。结果表明:融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,Exendin-4类似物纯度达91.8%。Exendin-4类似物的活性与对照组相比,具有显著的降低血糖和显著促进胰岛素分泌的活性(P〈0.01)。

英文摘要:

To construct, express and purify Exendin-4 analogue and detect its biological activity in vivo. Insert gene sequence into fusion partner ofpED plasmid which is helped to purification, entitled the new recombinant plasmid 5 .~xendin-4 analogue polypeptide gene and fusion partner gene was linkedby acidhydrolysis gene,transformed to E.coli BL21 and the fusion protein was induced by lactose, after acid hydrolysis, the Exendin-4 analogue polypeptide separated from fusion chaperon. Anion charge chromatography were used to further purification. 6 to 8 week-old ICR mice were injected(s.c) with Exendin-4 analogue, blood glucose and plasma insulin level was detected in different period after oral glucose tolerance test. The results show that high expression of inclusion body was induced by lactose, which accounted for 40% of germ proteins, the Exendin-4 analogue was obtained with the purity of 91.8% after being purified by anion charge chromatography. Bioactivity assay showed that the level of blood glucose of mouse which treated with exendin-4 analogue was obviously decreased to normal(P〈0.01), and the level of plasma insulin was increased obviously (P〈0.01).

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期刊信息
  • 《生物工程学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院微生物研究所 中国微生物学会
  • 主编:杨胜利
  • 地址:北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所内B401室
  • 邮编:100101
  • 邮箱:cjb@im.ac.cn
  • 电话:010-64807509
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-3061
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1998/Q
  • 邮发代号:82-13
  • 获奖情况:
  • 北京市优秀科技期刊期刊奖,中国科协首届优秀学术期刊奖,2000年中科院优秀科技期刊二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18441