位置:成果数据库 > 期刊 > 期刊详情页
三七病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析
  • ISSN号:0513-4870
  • 期刊名称:药学学报
  • 时间:2014.1.1
  • 页码:124-130
  • 分类:R931[医药卫生—生药学;医药卫生—药学]
  • 作者机构:[1]中国中医科学院中药资源中心,北京100070, [2]昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明650000
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(81130070,81173490).
  • 相关项目:WRKY转录因子调控丹参酮生物合成的研究
中文摘要:

在生物信息学分析基础上,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从三七中获得病程相关蛋白1(pathogensis.relatedprotein1,PRl)基因的开放阅读框,命名为PnPR1,测序结果显示该序列长501bp,编码166个氨基酸,其蛋白质分子质量为18.1kD。利用NCBI/Blastp和BioEdit软件进行同源性比对显示,PnPR1基因编码蛋白与葡萄、烟草、番茄等高等植物中的PRl蛋白同源性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白的保守结构域。将构建的重组载体pET28a(+).PnPR1在宿主菌EscherichiacoliBL21中经异丙基硫代移D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,在不同诱导时间、诱导温度、IPTG诱导浓度和IPTG添加时间下对诱导条件进行优化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析结果表明,PnPRI基因编码蛋白的最佳诱导条件为:IPTG终浓度0.4mmol·L-1、IPTG添加时间为转接后4h、诱导温度28℃、诱导时间20h。这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备奠定了一定的基础。

英文摘要:

By reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), an open reading frame of pathogenesis-related protein 1 (PR1) was isolated from Panax notoginseng and named as PnPR1. Molecular and bioinformatic analyses of PnPR1 revealed that an open reading frame of 501 bp was predicted to encode a 166-amino acid protein with a deduced molecular mass of 18.1 kD. Homology analysis showed that the deduced amino acid sequence of PR1 protein of Panax notoginseng had a high similarity with other higher plants had the same conservative structure domain of cysteine-rich secretory protein (CAP). The recombinant expressed plasmid pET28a(+)-PnPR1 was expressed in Escherichia coli BL21. The expression conditions were optimized by induction at different times, different temperatures, different IPTG concentrations and different giving times. The optimum expression condition was 0.4 mmol.L-1 IPTG at 28 ℃ for 20 h. The successful expression of PnPR1 provides some basis for protein purification and preparation of the monoclonal antibody.

同期刊论文项目
同项目期刊论文
期刊信息
  • 《药学学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国药学会 中国药学科学院药物研究所
  • 主编:王晓良
  • 地址:北京市先农坛街1号
  • 邮编:100050
  • 邮箱:yxxb@imm.ac.cn
  • 电话:010-63026192
  • 国际标准刊号:ISSN:0513-4870
  • 国内统一刊号:ISSN:11-2163/R
  • 邮发代号:2-233
  • 获奖情况:
  • 国家期刊奖,国家“双高”期刊,2002年为第2届国家期刊奖百种重点科技期刊并获第3...
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国国际药学文摘,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,荷兰医学文摘,美国生物医学检索系统,美国生物科学数据库,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,瑞典开放获取期刊指南,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:37721