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猪链球菌2型甲基受体趋化蛋白编码基因05SSU0273的原核表达及纯化
  • ISSN号:1002-2694
  • 期刊名称:中国人兽共患病学报
  • 时间:2013.3.3
  • 页码:220-225
  • 分类:R378.1[医药卫生—病原生物学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]南京师范大学生命科学学院,南京210023, [2]南京军区军事医学研究所,南京210002
  • 相关基金:国家自然科学基金(No.81071317;No.81172794;No.30972638;No.31170124)和江苏省自然科学基金项目(No.BK2010113;No.BK2011098;No.BK2010025;No.BK2010114;No.BK2011097)资助
  • 相关项目:重要人兽共患病原菌-2型猪链球菌中国强毒株反应调节因子CovR调控靶基因的筛选及其调节机制的研究
中文摘要:

目的原核表达猪链球菌2型甲基受体趋化蛋白编码基因05SSU0273。方法通过PCR方法检测该基因在不同血清型猪链球菌中的分布情况,然后利用获得的猪链球菌2型05SSU0273基因片段,构建重组表达载体pET32a::05SSU0273。将质粒转入E.coliBL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE和westernblot实验证实目的基因的表达,然后以His亲和层析柱纯化重组蛋白。结果在S.suis235个血清型标准株中,有20株分离株扩增出目的条带。重组质粒可在宿主菌中高效表达,经镍柱亲和层析得到相对分子质量为43kD的重组蛋白。结论本实验成功获得S.suis2MCP蛋白,为研究其在猪链球菌2型致病过程中发挥的作用奠定了基础。

英文摘要:

To study the biological function of the methyl-accepting chemotaxis protein (MCP) gene 05SSU0273 and its products in Streptococcus suis serotype 2, a pair of specific primers was designed for the gene 05SSU0273, and the target DNA fragment was successfully amplified using the genomic template of Chinese strains 05ZYH33. Subsequently, target gene was inserted into pMD18-T vector, and then subcloned into prokaryotic expression vector pET32a, generating a recombinant ex- pression plasmid pET32a: : 05SSU0273. Direct DNA sequencing method was used to confirm its correctness. The recombinant plasmid was then transformed into E. coli BL21. After IPTG induction, this bacteria could produce the target MCP protein with 6 )〈 his-tag which could be purified by affinity chromatography system. The results of SDS-PAGE and Western-blot showed that the fusion protein had a relative molecular weight of 43 kD. Moreover, MCP gene had been detected in 20 of 35 S. suis strains with different serotypes. This prevalence indicated that protein MCP might play a role in the survival of S. suis 2 in different hosts. Together, our work laid foundation for functional research on MCP in S. suis 2.

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期刊信息
  • 《中国人兽共患病学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国微生物学会
  • 主编:严延生
  • 地址:福州市津泰路76号
  • 邮编:350001
  • 邮箱:rsghb@fjcdc.com.cn
  • 电话:0591-87552018
  • 国际标准刊号:ISSN:1002-2694
  • 国内统一刊号:ISSN:35-1284/R
  • 邮发代号:34-46
  • 获奖情况:
  • 中国基础医学核心期刊,中国生物医学核心期刊,中国科学引文数据库列为来源期刊及统计源,中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:9000