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艰难梭菌毒素A羧基端基因的克隆与表达
  • ISSN号:1674-8913
  • 期刊名称:《医学争鸣》
  • 时间:0
  • 分类:R516.1[医药卫生—临床医学;医药卫生—内科学]
  • 作者机构:[1]南方医科大学南方医院消化病研究所,广东广州510515
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(30570839);广东省自然科学基金项目(05004735);广州市科委基金资助项目(200223-E4101)
中文摘要:

目的:克隆并表达艰难梭菌毒素A羧基末端受体结合区(CDTAR)基因.方法:PCR扩增CDTAR基因并将其克隆到表达载体pET-22b(+),重组质粒转化到E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)对表达产物进行分析.结果:构建了含CDTAR基因的重组质粒pET-CDTAR,IPTG诱导后SDS-PAGE显示表达出M,约为35.7ku的重组蛋白,占菌体总蛋白的36.1%,可溶性表达占上清的22.2%,包涵体中约占24.9%.结论:成功克隆了CDTAR基因,并构建表达了CDTAR重组蛋白,为进一步研究CDTAR功能及研制艰难梭菌疫苗奠定了基础。

英文摘要:

AIM: To obtain the high expression of the gene coding for clostridium difficile toxin A receptor binding zone (CDTAR). METHODS: The clostridium difficile toxin A Cterminal repeated gene was amplified by PCR and cloned into the prokaryotic expression vector pET-22b( + ) , and the recombined plasmid pET-CDTAR was transformed into E. coli strain BL21 (DE3). The recombined vector was confirmed by digestion with EcoRI/XhoI and sequencing. The E. coli strain BL21 (DE3) containing pET-CDTAR was induced with IPTG and analyzed with SDS-PAGE. RESULTS: A 35.7 ku protein was acquired after inducing with IPTG and thin layer scanning suggested that CDTAR occupied 36.1% of the total bacterial protein, 22.2% of the supematant and 24.9% of the inclusion body. CONCLUSION: The cloning and high expression of clostridium difficile toxin A receptor gene lay a foundation for the further study on CDTAR function and clostridium difficile vaccine.

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期刊信息
  • 《医学争鸣》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:第四军医大学
  • 主办单位:第四军医大学
  • 主编:樊代明
  • 地址:西安长乐西路169号
  • 邮编:710032
  • 邮箱:edjfmmu@fmmu.edu.cn
  • 电话:029-84774674 84773456 84773804 84773814
  • 国际标准刊号:ISSN:1674-8913
  • 国内统一刊号:ISSN:61-1481/R
  • 邮发代号:52-86
  • 获奖情况:
  • 荣获首届国家期刊奖,第二届国家期刊奖提名奖,第五届百种中国杰出学术期刊,中国高校优秀科技期刊等
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:720