采用食品级乳酸链球菌(乳链菌)作为载体,表达艰难梭菌A毒素C末端重复序列(14CDTA)抗原作为活菌口服疫苗。研究中采用基因拼装的方法,以乳酪链球菌启动子p59和乳链菌分泌型蛋白Usp45的RBS、信号肽和终止子为基本骨架,建立乳链菌的载体表达系统,在乳链菌中表达分泌型14CDTA作为口服活菌疫苗;探索酿脓链球菌M6蛋白的膜锚定序列(CWAM6)与14CDTA联合应用的免疫效果;明确无毒性破伤风毒素C片(TETC)作为艰难梭菌疫苗的生物佐剂作用;观察重组乳链菌作为活菌疫苗在小鼠受艰难梭菌攻击时保护效果,观察小鼠的病死率和肠道的组织学改变,乳链菌和艰难梭菌在肠道的定植情况,血清或/和肠道粘膜IgA、IgG、IgM抗体滴度和特异性抗14CDTA、TETC抗体滴度的变化,肠道粘膜炎性因子水平的变化;明确重组乳链菌对艰难梭菌攻击的保护作用,最终为得到一种能预防艰难梭菌感染的口服活菌疫苗奠定基础。