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粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性
  • ISSN号:0454-6296
  • 期刊名称:《昆虫学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q966[生物学—昆虫学]
  • 作者机构:[1]深圳大学生命科学学院,广东深圳518060, [2]深圳市微生物基因工程重点实验室,广东深圳518060
  • 相关基金:国家“863”计划(2002AA214011);国家自然科学基金项目(30471505,30271226);广东省科技重大专项(2003A3080502);深圳市科技计划项目
中文摘要:

粉尘螨Ⅰ类变应原(DerfⅠ)是粉尘螨Dermatophagoides farinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMDl8)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-Der fⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出Der fⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Western blot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。

英文摘要:

Der fⅠ is a major allergen of Dermatophagoidesfarinae, which can induce the type Ⅰ allergy. In this study, the live mites of South China area which had been identified and cultured were picked. The total RNA was extracted. The Der f Ⅰ gene fragment was amplified with RT-PCR, cloned into pMD18-T vector, and sub-cloned into the expression vector pET. The recombinant plasmid pET24a-Der f Ⅰ so constructed was expressed through the induction of IPTG. The expressed Der f Ⅰ protein was purified by immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC). Recombinant Der fⅠ protein was expressed in E. coli host strain BL21 star in the form of inclusion body, and its allergenicity was confirmed by the western blot.

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期刊信息
  • 《昆虫学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国昆虫学会 中国科学院动物研究所
  • 主编:黄大卫
  • 地址:北京东中关村中国科学院动物研究所
  • 邮编:100101
  • 邮箱:kcxb@ioz.ac.cn
  • 电话:010-64807173 010-64807099
  • 国际标准刊号:ISSN:0454-6296
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1832/Q
  • 邮发代号:2-153
  • 获奖情况:
  • 国家期刊方阵“双百期刊”
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,美国剑桥科学文摘,美国生物科学数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:16190