中文摘要：

目的研究前期鉴定的5条丙型肝炎病毒（HCV）特异忡细胞毒性T细胞（CTL）表位的HLA—A2限制性及其免疫学效应。方法基于1、2细胞株，采用MHC-肽复合物稳定性试验研究前期鉴定的HCV特异性CTL表位与HLA—A2分子的亲和力；采用细胞内细胞因子染色（intracellular cytokine staining，ICS）和ELISPOT研究上述HLA—A2限制性CTL表位体外刺激HLA—A2阳性外周血单个核细胞（PBMC）产生肽特异性CTL的效应；采坩CTL杀伤试验研究上述肽特异性CTL杀伤靶细胞（负载相同肽的T2细胞）的效应。结果前期研究鉴定的5条CTL表位肽中，NSdb_78（SMMAF-SAAL）和NS5a_367（TVSSALAEL）与HLA—A2分子有高亲和力（FI〉1）；ELISPOT结果显示NS4b_78（SMMAFSAAL）和NS5a_367（TVSSALAEL）可诱导高水平的分泌IFN-γ的效应细胞[分别为（60±6）SFC／10^4 PBMCvs（4±1）SFC／10^4 PBMC，P〈0．001：（10±3）SFC／10^4 PBMC vs （2±1）SFC／10^4 PBMC，P〈0．001]；ICS结果证实这两条肽刺激HLA—A2阳性PBMC后，在CD8^＋T细胞中产生了高百分比的CD8^＋ IFN-γ^＋ T[分别为（2．33±0．22）％vs（0．05±0．01）％，P〈0．001；（0．36±0．06）％vs（0．03±0．01）％，P〈0．001]；并且，肽特异性CTL可特异性杀伤负载相同肽的T2细胞。结论NS4b_78（SMMAFSAAL）和NS5a_367（TVSSALAEL）受HLA—A2限制，并具有较好的免疫原性。

英文摘要：

Objective To explore the HLA-A2 restriction and immunogenieity of 5 previously identified HCV-specific CTL epitopes. Methods Based on T2 cell,to explore the HLA-A2 restriction of previously identified HCV-specific CTL epitopes by MHC-peptide complex stabilization assay;To detect peptide-specific CTL in HLA-A2 ＋ PBME stimulated by HLA-A2-restricted peptides by intracellular cytokine staining（ICS） and ELISPOT; To explore the eytotoxieity of peptide-specifie CTL to same peptide-loaded T2 cells （target cells） by CTL cytotoxicity test. Results Among 5 previously identified CTL epitopes NS4b_78 （SMMAFSAAL） and NS5a_367 （TVSSALAEL） have high-affinity for HLA-A2 molecules（ FI 〉 1 ） ; ELISPOT results shown that NS4b_78 （SMMAFSAAL） and NS5a_367 （TVSSALAEL） induced high levels of IFN-γ-seereting cells [ （60 ± 6） SFC/10^4 PBMC vs （4 ± 1 ） SFC/10^4 PBMC, P 〈 0.01 ; （ 10±3） SFC/10^4 PBMC vs （2± 1 ） SFC/10^4 PBMC, P 〈0.01, respectively] ;ICS results indicated that there were high percentages of CD8 ^＋ IFN-γ^＋ T cells in total CD8^＋ T cells stimulated by these peptides [ （ 2.33 ± 0.22 ） % vs （ 0.05 ± 0.01）%, P〈0.001;（0.36 ±0.06）% vs （0.03±0.01）%, P〈0.001, respectively]. Furthermore, peptide-specific CTL could effectively kill same peptide-loaded T2 cells. Conclusion NS4b_78 （ SMMAF- SAAL） and NS5a_367 （TVSSALAEL） were identified as HLA-A2-restricted CTL epitopes which could induce immune response in vitro.