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重组hS100A6蛋白的原核表达及其对人骨肉瘤细胞系143B的生物学作用
  • ISSN号:1671-8135
  • 期刊名称:《中国生物工程杂志》
  • 时间:0
  • 分类:Q819[生物学—生物工程]
  • 作者机构:[1]重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016
  • 相关基金:国家自然科学基金面上项目(30772548)资助项目
中文摘要:

目的:制备重组hS100A6蛋白,并研究其对人骨肉瘤细胞系143B的生物学作用。方法:构建pGST-HRV3C.hS100A6质粒,经转化至E.coliBL21,WFG诱导表达融合蛋白GST.HRV3C—hS100A6,经超声破菌,谷胱甘肽一琼脂糖4B球珠纯化,GST.HRV3C酶切,再纯化,Westernblot鉴定,分光光度法蛋白定量。以人骨肉瘤细胞系143B为研究对象,MTT检测细胞增殖,Hoechst检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Westernblot检测hSIOOA6对B.catenin表达的影响。结果:成功制备重组hS100A6蛋白,测得该蛋白产量约为4mg/L菌液。301xg/ml重组hS100A6促进143B细胞的增殖、迁移、侵袭以及B—catenin的表达(P〈0.05),对143B细胞的凋亡无明显影响(P〉0.05)。结论:成功制备重组hS100A6蛋白,301xg/ml重组hS100A6蛋白对143B细胞有一定的促进作用。

英文摘要:

Objective :To preparation recombinant hS100A6 protein and study its biological effects on human osteosarcoma cell line 143B. Methods: Recombinant plasmid pGST-HRV3C-hS100A6 was constructed and transformed into E. coli BL21, then induced by IPTG. After lysed by ultrasound, the fusion protein GST-HRV3C-hS100A6 was purified by Glutathione-Sepharose 4B beads( GS4BB), next, digested by GST-HRV3C. the pure recombinant hS100A6 (rhS100A6) was harvestd after removing GST and GST-HRV3C by GS4BB and then identified by Western blot and quantitatied by Spectrophotometry. MTT assay and Hoechst staining were used to detect proliferation and apoptosis of human osteosarcoma cell line 143B, respectively, transwell was used to detect migration and invasion, Western blot was used to detect expression of β-catenin. Results: rhS100A6 was successfully prepared and the protein yield was about 4 mg / L broth. 30p, g/ml of rhS100A6 could promote cell proliferation, migration, invasion and expression of β-catenin ( P 〈 0.05 ) , meanwhile had no significant effect on apoptosis of 143B cell line( P 〉 0.05 ). Conclusion : rhS100A6 is successfully prepared, 30μg/ml of rhS100A6 has promotive effects on human osteosarcoma cell line 143B.

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期刊信息
  • 《中国生物工程杂志》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院文献情报中心 中国生物技术发展中心 中国生物工程学会
  • 主编:张树庸
  • 地址:北京市中关村北四环西路33号
  • 邮编:100080
  • 邮箱:biotech@mail.las.ac.cn
  • 电话:010-82624544 82626611-6631
  • 国际标准刊号:ISSN:1671-8135
  • 国内统一刊号:ISSN:11-4816/Q
  • 邮发代号:82-673
  • 获奖情况:
  • 1991年中国科学院科技进步三等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:12959