中文摘要：

三萜类化合物是灵芝的主要药用成分，其含量的多少与灵芝药效的高低密切相关。鲨烯单加氧酶是灵芝三萜类化合物合成的关键酶，是生物合成三萜的第一步氧化反应。根据已报道的其它物种鲨烯单加氧酶氨基酸序列的保守区，设计简并引物，经PCR扩增，得到灵芝鲨烯单加氧酶的特异性DNA片段。利用该片段做探针，从灵芝cDNA文库和基因组文库中筛选出编码鲨烯单加氧酶基因的cDNA序列和基因组DNA序列，并对灵芝鲨烯单加氧酶

结论摘要：

灵芝是一种重要的药用真菌，在我国已有悠久的药用历史。三萜类化合物是灵芝的重要药用成分，三萜含量的多少成为衡量灵芝质量好坏的重要指标。根据不同发育阶段灵芝三萜含量测定的结果，选择灵芝的原基，提取总RNA，构建了灵芝原基的表达型cDNA文库。根据对已发表的其它物种鲨烯单加氧酶氨基酸序列，针对鲨烯单加氧酶的保守区，设计简并引物，以灵芝基因组DNA为模板，经PCR扩增，获得了的灵芝鲨烯单加氧酶基因特异片段。利用获得的灵芝鲨烯单加氧酶基因特异片段，从灵芝cDNA文库中筛选得到了灵芝鲨烯单加氧酶基因的全长cDNA序列，该序列编码区长1446bp，编码481个氨基酸残基。经原核表达后，产生50KD大小的蛋白。Southern blot分析结果表明，在灵芝基因组中灵芝鲨烯单加氧酶基因为单拷贝。检测了不同发育阶段灵芝中鲨烯单加氧酶的表达情况。Western blot结果证明，在灵芝的原基中鲨烯单加氧酶表达水平较高，而在菌丝体阶段未检测到蛋白表达。对灵芝鲨烯单加氧酶基因上游调控序列的分析表明，灵芝鲨烯单加氧酶具有甾醇调控蛋白结合位点，但与人鲨烯单加氧酶的调控方式可能并不完全相同。