中文摘要：

设计并构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)。将不同剂量的dsRNA转染体外培养的人喉鳞癌细胞系Hep-2、鼻咽癌细胞株CNE、人胚喉上皮细胞及人胚胎干细胞，观察受转染细胞的dsRNA摄入时间过程、hTERT mRNA 表达、端粒酶活性、细胞周期、原位凋亡、细胞超微结构变化及细胞活性等；检测dsRNA转染后P53蛋白、PCNA 蛋白、MRP(多药耐药相关基因蛋白)mRNA、c-myc mRNA变化。将dsRNA分子经荷瘤裸鼠瘤体内注射或静脉注射研究其活体抗瘤效应、比较此两种用药方式的优劣及其副作用大小。本项目将为hTERT基因沉默（gene silencing，或称RNAi）用于晚期喉癌基因治疗的一期临床试验提供直接的理论依据和实验基础；为hTERT基因沉默治疗各种恶性肿瘤提供实验参考；同时探讨头颈肿瘤演进的可能机制。

结论摘要：

本研究设计并构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)。将dsRNA转染体外培养的人喉鳞癌细胞系Hep-2、鼻咽癌细胞株CNE及人骨髓间充质干细胞，观察受转染细胞的dsRNA摄入时间过程、 hTERT mRNA 表达、端粒酶活性、细胞周期、原位凋亡、细胞超微结构变化及细胞活性等；检测dsRNA转染后P53、PCNA、c-myc蛋白及mRNA变化。将dsRNA经荷瘤裸鼠瘤体内注射研究其活体抗瘤效应及其副作用大小。研究发现，本研究构建的dsRNA质粒能够有效抑制体外培养的喉癌、鼻咽癌细胞hTERT及端粒酶活性表达，抑制细胞增殖活性，并诱导大量的细胞凋亡；人骨髓间充质干细胞hTERT及端粒酶活性阴性，该质粒对细胞增殖活性无影响；该质粒能有效治疗喉癌荷瘤动物模型，抑瘤率达75％，且无明显毒副作用。hTERT及端粒酶活性受抑制后，c-myc、PCNA、P53、Caspase-8等癌基因及抑癌基因出现不同程度的变化。本研究结果提示，hTERT基因沉默对头颈肿瘤具有较好的治疗作用，本研究为RNA干扰治疗喉癌的临床应用奠定了实验基础。