本项目采用功能基因组的研究方法分析SARS冠状病毒感染细胞的方式以及病毒在细胞内复制的机理。(1)采用寡聚核苷酸芯片技术检测SARS冠状病毒感染细胞前和感染细胞后的细胞内基因表达的变化情况。对芯片的数据进行分析表明SARS冠状病毒感染Vero-E6细胞与正常细胞的基因表达的比例变化非常明显,其中显著表达下调的达到144个基因,显著表达上调的达到57个基因。(2)利用蛋白质二维电泳技术和质谱技术分析SARS冠状病毒颗粒(感染细胞的培养液)的蛋白质组情况和蛋白质修饰情况.我们鉴定出了已知的SARS冠状病毒的所有结构蛋白,包括S、E、M、N等蛋白。此外,我们还发现了一种SARS冠状病毒基因组ORF3编码的新蛋白,它可能通过二硫键与S蛋白相结合;用SARS病人的血清进行研究,发现这种蛋白的多克隆抗体能发生免疫学反应,表明这一新蛋白有可能在功能上也和S蛋白紧密相关。(3)我们采用差异荧光双向电泳和稳定同位素标记ICAT定量方法,对感染SARS病毒前后的宿主细胞进行大规模蛋白质差异谱的分析,已确定了300个左右的差异蛋白质。
英文主题词SARS; Coronavirus; Functional Genomics; Proteomics