本研究旨在界定调控猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)的感染性、基因组RNA 复制、亚基因组mRNA 转录以及翻译等病毒复制过程的非编码区(UTR)序列结构。在本室所建立的反向遗传系统的基础上,首先在两端UTR 前后插入限制性酶切位点以便分离UTR 并对其进行系列缺失。将这些突变体DNA 或经体外转录的RNA 转染细胞,检测后者所致细胞病变和病毒RNA 组分的变化,证明特定缺失区有重要的基因调控功能。利用化学和核酸酶法对分离的UTR RNA 的二级结构进行探测,在此基础上进行点突变确定了RNA 二级结构的重要性。利用双报告基因系统在试管内和转染细胞中检测5'UTR的IRES 功能,并对后者的功能区进行系列缺失法定位。最后,通过突变法插入并检测到不等长度的poly(A)在病毒复制过程中有相应的重要调控作用。
英文主题词PRRSV;UTR;regulation;IRES;replication