中文摘要：

乳腺癌紧次于肺癌，成为女性第二大杀手。乳腺癌细胞的浸润与转移是影响其疗效及预后的重要因素之一。研究发现乳腺癌细胞中，泛素-蛋白酶体系统功能加强，其中E3酶UBE3A基因与蛋白质均高表达，且其表达水平与癌细胞的浸润能力呈正相关；与此同时，与浸润及转移有关的蛋白annexin A2也高表达，且有泛素化修饰。结果提示泛素-蛋白酶体系统对annexin A2调节可能是由E3酶UBE3A介导，该E3酶通过改变annexin A2在乳腺癌细胞中的活性（功能）和亚细胞定位来发挥作用。本课题拟通过研究E3酶UBE3A基因在阻低前后乳腺癌细胞中annexin A2的表达、活性、泛素化、亚细胞定位等情况以及乳腺癌细胞浸润与转移能力的差异，以探讨乳腺癌细胞中annexin A2表达上调与泛素化调节的关系，筛选与乳腺癌药物治疗相关的生物学靶标。

结论摘要：

乳腺癌有极高的发病率与死亡率，乳腺癌的浸润与远处转移是影响乳腺癌疗效、复发与预后最重要的因素之一，因此，对乳腺癌细胞浸润与转移能力的研究倍受关注。本课题在前期研究中发现，泛素-蛋白酶体系统中的E3酶UBE3A在人体手术切除的乳腺癌组织细胞中表达增高，且在向远处浸润细胞中比形成细胞团细胞中表达高；同时癌组织细胞中annexinA2的表达异常，因而本课题研究UBE3A与annexinA2、乳腺癌细胞浸润与转移能力的关系及其机制，为乳腺癌病理机制的研究与治疗提供实验依据。 本课题首先采用RNA干扰阻低UBE3A，发现乳腺癌细胞的增殖、浸袭能力降低，而凋亡增加且细胞主要处于S期，结果提示UBE3A与乳腺细胞浸袭能力、凋亡等有密切关系，同时，UBE3A可能通过作用于S期，促进DNA的合成（组蛋白的合成），UBE3A阻低后DNA合成受到抑制，而影响乳腺癌细胞的增殖，但裸鼠实验时UBE3A阻低组癌块大小与对照组无明显差别（P>0.05）；差异蛋白质组学研究结果发现，UBE3A影响乳腺癌细胞生物学行为的主要机制可能与癌细胞内糖代谢及蛋白酶体亚单位改变等有关。我们通过对临床人体手术切除乳腺癌组织进行免疫组织化学染色，结果发现在大部分癌组织中UBE3A与annexinA2表达均增高；当UBE3A被阻低后，annexinA2表达也随之降低，结果提示，作为E3酶的UBE3A对annexinA2作用不只是简单的降解作用。我们使用临床人体手术切除乳腺癌组织，通过SSCP-PCR观察到annexinA2的基因表达有比较稳定的突变或缺失，相应的氨基酸可能也发生了改变；同时通过激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察到，阴性对照组中annexinA2的表达主要集中在膜上，而当UBE3A被阻低后，annexinA2的表达主要集中在核上，提示乳腺癌组织中annexinA2发生稳定的突变，UBE3A对AnnexinA2的作用主要是通过改变annexinA2亚细胞定位而影响乳腺癌细胞的生物学形为。 综上所述，UBE3A与annexinA2可能存在密切关系，二者在乳腺癌生物学行为中扮演着重要角色；通过对UBE3A对annexinA2的研究，一方面为阐明乳腺癌的病理机制提供科学依据，另一方面，二者也可能是临床相关的重要生物标记和/或靶标。