中文摘要：

本课题选用HIF-1a 高表达和高侵袭转移能力的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231为研究对象, 并以几个其他人乳腺癌细胞系作参照，采用siRNA干扰方法结合双向凝胶电泳和质谱技术分离、寻找并鉴定差异蛋白。用Western blot 或定量PCR技术验证差异蛋白。选择1-2个差异蛋白，通过构建表达载体重新转染HIF-1a 干扰后的细胞，观察蛋白表达后肿瘤细胞生物学行为的变化。结果HIF-1a干扰后鉴定出有显著差异性的蛋白21个，对其质谱鉴定，归类发现差异蛋白涉及细胞骨架蛋白、无氧酵解代谢酶、核酸代谢酶和与过氧化物酶，其中绝大部分已经报道是HIF-1的靶蛋白。进一步构建了HIF-1a 的表达载体，重新恢复HIF-1的活化，验证HIF-1在肿瘤细胞生长、凋亡中的作用。构建CK18表达载体转染细胞，检测CK18对细胞的生长、凋亡和侵袭能力等影响。对非转移乳腺癌组织和转移乳腺癌原发病灶和转移灶肿瘤组织进行转移相关蛋白的免疫组化检测，探讨了转移相关基因蛋白的作用。揭示HIF-1和其靶蛋白CK18在乳腺癌的发生、发展和演进的作用。结论?HIF-1在乳腺癌细胞的生长/凋亡调节依赖于细胞骨架如CK18和Caspase途径。