中文摘要：

首先建立稳定的B细胞体外大量扩增技术，并证实扩增的B细胞具有明显的抗原递呈功能，在此基础上，将肝癌的RNA和mRNA作为抗原，转染体外扩增的B细胞（通称B/RNA技术对CD40配体活化的B细胞简称CD40-B/RNA技术，对B细胞生长因子活化的B细胞简称BlyS-B/RNA技术），在体外研究其对特异性杀伤细胞（CTL）的诱导及对肝癌细胞的杀伤作用，并与树突状细胞瘤苗比较，明确B/RNA技术在肝癌治疗中的价值，为过渡到临床应用提供参考。

结论摘要：

原发性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）除手术切除外对放疗和化疗多不敏感，免疫治疗和基因治疗一直是肝癌治疗领域中的一个研究重点。鉴于CD40L具有调节免疫和抗肿瘤的双重效应，结合近年有关RNA疫苗方面的成就，本课题构建了人CD40L基因真核表达质粒，并将其转染人肝癌细胞系HepG2细胞，检测CD40L对HepG2细胞杀伤效应并探讨其机理；另一方面，应用CD40L在体外扩增B淋巴细胞，并用HepG2细胞及人肝癌原代培养细胞的总RNA转染B淋巴细胞，建立了CD40-B/RNA技术，在体外研究其对肝癌细胞的杀伤作用。结果表明构建的人CD40L基因真核表达质粒序列正确，可以在人肝癌细胞HepG2中稳定表达。稳定表达CD40L的HepG2细胞CD40表达减少，细胞周期阻滞在G0/G1期，Fas表达上调，由Fas/FasL凋亡通路最终导致HepG2发生凋亡。CD40L可以在体外大规模扩增、活化B淋巴细胞，以此作为抗原递呈细胞，负载HepG2细胞及原代培养的肝癌细胞总RNA，可在体外诱导产生特异性CD8+ CTL，这些都将为HCC提供一种可能有效的疫苗治疗方法。