中文摘要：

卵巢表皮细胞肿瘤是引起妇女肿瘤疾病死亡的主要因素，寻找新的早期肿瘤标记以期早期诊断是治疗该疾病并提高存活率的关键，该标记也可能成为治疗的靶点。癌-睾丸抗原是一种重要的肿瘤标记抗原，其中精子相关抗原是一种新型癌-睾丸抗原。精子相关抗原6（SPAG6）是一种微管结合蛋白，我们前期研究已发现，SPAG6缺失小鼠生长比正常小鼠明显缓慢，SPAG6 mRNA能在多种肿瘤组织表达，以及在SKOV-3等卵巢肿瘤细胞中表达显著增加，该蛋白可能调控卵巢肿瘤生长，是一种新的卵巢肿瘤标记以及肿瘤治疗的靶点。本课题拟进一步分析该基因在卵巢表皮肿瘤组织中的表达与启动子甲基化的联系，并建立抑制SPAG6表达的SKOV-3稳定细胞系，以研究该基因与肿瘤细胞生长、迁移、以及肿瘤生成的关系，同时结合对SPAG6与微管间稳定性的研究，以期为卵巢表皮肿瘤提供一个新标记，为治疗该疾病提供新的线索。

结论摘要：

卵巢癌在全球范围内是恶性程度最高的女性生殖系统肿瘤之一，肿瘤抗原特异的免疫治疗可能具有重要潜在的临床价值。精子相关抗原6（SPAG6），作为一种新的癌-睾丸抗原，是非常具有前景的肿瘤免疫治疗靶点，但是该基因在卵巢癌发病中的关键分子机制仍不清楚。本课题目的在于阐明SPAG6在卵巢癌发生过程中的作用。本研究收集了卵巢表皮癌及正常对照卵巢组织，应用免疫组织化学方法检测了石蜡切片组织中SPAG6蛋白的表达水平，应用焦磷酸盐测序法分析了SPAG6启动子区域甲基化状态，并分析SPAG6低表达对卵巢癌上皮细胞恶性生物学形状，如生长、迁移、侵袭、软琼脂克隆形成等能力的影响，检测了SPAG6低表达对泰素敏感性及裸鼠皮下成瘤性的作用；我们也探讨了去甲基化剂对卵巢上皮细胞SPAG6表达的作用。我们共收集了40例卵巢表皮癌及40例正常对照卵巢组织，免疫组织化学结果发现，卵巢癌标本肿瘤组织SPAG6蛋白表达水平明显高于临近非肿瘤组织；应用焦磷酸盐测序法共检测了SPAG6基因启动子区域76个CpG岛甲基化状态，发现15个异常甲基化CpG岛，其中4个高甲基化，11个低甲基化；我们构建了靶向SPAG6基因的RNA干扰载体，转染细胞，发现可以显著将SPAG6表达抑制；接着我们发现，转染有RNA干扰载体的肿瘤细胞SKOV-3生长速度降低，细胞划痕、Transwell实验发现肿瘤细胞迁移速度减慢、侵袭能力下降，软琼脂克隆形成实验发现细胞克隆形成率降低，在裸鼠皮下成瘤能力也下降，体外细胞实验发现肿瘤细胞对泰素敏感性升高。另外，去甲基化剂处理正常卵巢上皮细胞后，实时定量PCR检测发现SPAG6基因mRNA表达水平较未处理的细胞显著增加，其表达升高可能通过上述11个低甲基化位点发挥作用。总之，我们的结果表明，SPAG6可作为卵巢癌诊断的参考指标，以及卵巢癌免疫治疗的可能靶点，但仍需深入的后续研究。