中文摘要：

本课题拟在原研究工作的基础上，进一步构建hTERTp调控TK基因肿瘤特异表达系统,即hTERTp/TK/pGl3（CMV对照）,转染鼻咽癌细胞株及鼻咽癌裸鼠移植瘤，加入GCV前体药物（其它头颈肿瘤细胞及正常上皮细胞为对照组细胞），采用分子生物学方法检测TK基因表达、GCV诱导鼻咽癌细胞死亡检测、肿瘤细胞端粒酶及hTERT检测（转导入细胞前后对照）及带瘤动物局部注射hTERTp/TK肿瘤特异表达系统后，体内实验分析对鼻咽癌移植瘤杀灭抑制（设其它头颈肿瘤移植瘤和正常对照组）及全身应用的安全性（检测实验动物的肝肾毒性及免疫原性）问题。这对在目前鼻咽癌临床治疗效果不佳，探询肿瘤基因治疗势在必行的大前提下，将为鼻咽癌临床治疗寻找安全、有效及特异性高的基因治疗新策略打下坚实基础。由于hTERT驱动下的特异杀灭肿瘤细胞体系，具有较广泛的抗肿瘤谱，本研究也将有助于推动其它同类型肿瘤基因治疗的研究与应用。

结论摘要：

肿瘤基因靶向治疗成为目前的研究方向，自杀基因因杀细胞无选择性，临床应用受到限制。故寻找理想的靶点成为靶向治疗的关键。基于端粒酶及其亚单位hTERT在包括鼻咽癌在内的绝大多数恶性肿瘤中高表达，在正常组织细胞中不表达的事实，本课题以端粒酶为靶点，成功构建hTERT启动子调控TK基因的表达载体，hTERT/TK/pGL3，体外通过脂质体将hTERT/TK/pGL3瞬时转染鼻咽癌HNE1和CNE2 细胞，加入GCV48小时后观察对鼻咽癌细胞的杀伤作用、TK基因表达、端粒酶及其亚单位活性改变。以TK/pGL3、hTERTp/pGL3及pGL3做阴性对照，以CMV/TK/pGL3做阳性对照。选择正常成纤维细胞做对照，采用MMT法、PCR、倒置显微镜观测、细胞培养及转染等方法检测转染细胞中上述指标。结果显示所构建的特异表达载体具有特异性杀伤鼻咽癌细胞的作用，而对正常对照细胞没有影响，TK基因在有hTERT启动子调控下在肿瘤细胞中阳性表达，研究组端粒酶及其hTERT活性较对照组降低，说明hTERT启动子能够调控TK基因靶向杀伤鼻咽癌细胞,这对开展鼻咽癌基因靶向治疗及其今后临床应用有重要意义。