弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种寄生于所有有核细胞的人兽共患原虫。由于其复杂的生活史和多样的形态结构,弓形虫成为学者研究的焦点。本研究对弓形虫RH 株进行体外培养,收集虫体,提取总RNA,反转录,构建弓形虫cDNA 文库,用体内诱导抗原技术(in vivo induced antigen technology, IVIAT),利用吸附的弓形虫病康复猪血清,对已经建立的弓形虫cDNA文库进行筛选,得到体内诱导抗原基因31个,并对TgCaM, TgPI, TgGRA5, TgMIC11和TgCyp五个基因进行体内外表达差异的验证和体外表达。对TgCaM基因进行了转录水平的RNAi, mRNA转录水平抑制效率可达到88.04%。同时,克隆TgMIC3和TgSAG1基因,分别构建了重组自杀性DNA质粒和重组杆状病毒,免疫活性和保护力实验证实重组弓形虫自杀性DNA质粒和杆状病毒能刺激巴贝西小鼠产生体液免疫和细胞免疫,对致死性弓形虫攻击有一定的免疫力,可作为疫苗候选,预防弓形虫病。
英文主题词Toxoplasma gondii; in vivo induced antigen; gene fuction;TgCaM