在我们已完成的国家 973 课题研究中,从葡萄胎与正常早孕绒毛的差示 cDNA 文库中筛选出一条新基因 F10(EBML 登录号 AB196290)。在本课题中,我们采用细胞免疫组化和荧光定量PCR技术筛选出F10基因低表达的A549细胞株,构建了稳定表达F10基因的A549细胞系。通过MTT法和流式细胞术以及免疫组化技术,发现F10基因通过影响细胞周期和上调增殖核抗原和细胞周期素D1的表达,促进细胞的生长增殖。采用TUNEL和Western Blot方法,发现F10基因抑制A549细胞凋亡,下调caspase-3的表达,并抑制A549细胞对紫杉醇化疗敏感性。同时应用 RNAi技术成功建立了F10基因表达下调的KLE细胞克隆, 采用荧光定量RT-PCR技术和Western Blot方法检测,发现F10沉默的细胞克隆中BCL-2表达下调,提示线粒体途径参与了F10基因沉默诱导的细胞凋亡的机制,细胞色素C的释放提示是F10沉默诱导KLE细胞凋亡的途径之一 。本课题属原始创新性研究,通过对葡萄胎高表达的F10基因功能的初步研究,为将来发展基于 F10 基因的肿瘤防治新措施提供了理论。
英文主题词hydatidiform mole; tumor; new gene; gene