生长素是植物发育的必要调节子,harpinXoo是来自水稻白叶枯病菌、能激发植物产生过敏性反应(Hypersensitive response,HR)的蛋白。初步的研究表明生长素能逆转harpin激发的过敏性反应,是否也能在表达harpinXoo的转基因植物中调控harpinXoo激发的HR?本研究拟采用荧光定量PCR、液相色谱、凋亡细胞染色等方法,测定生长素反应因子ARF、植物防卫反应相关基因hsr203、NPR1、hin1等基因的表达水平以及植物体中生长素的浓度,结合植物表型反应,从基因表达水平、细胞水平去研究表达harpin的转基因烟草中生长素与植物防卫反应间的相互作用,结合生物信息学方法,分析生长素在植物防卫反应信号途径中的角色,明确生长素对harpin激发的HR的调控机制,为研究植物与病原菌的互作及植物防卫反应机制提供科学依据。
确定了高效液相色谱法测定烟草和棉花叶片中生长素含量的样品前处理方案及色谱条件,首次建立了高效液相色谱法测定烟草和棉花叶片中生长素含量的方法,建立了检测注射蛋白部分的烟草叶片内部的IAA含量的变化的高效液相色谱法。明确了生长素吲哚乙酸(IAA)可以逆转harpinXoo蛋白引起的HR,也可以调控harpinXoo蛋白引起的氧爆发,同时,harpin蛋白在烟草上能引起PCD现象,IAA可延迟或削弱harpin蛋白引起的植物细胞凋亡。明确了IAA不仅可以直接作用harpin蛋白逆转HR,还可以通过诱导方式逆转harpin激发的HR,IAA可通过烟草叶组织不同方向逆转harpin引起的HR,但是生长素信号不能从叶柄向叶片中传导逆转harpin引起的HR。明确了IAA特异性地逆转harpin激发的HR,但是对壳聚糖溶液引起的HR反应无明显的抑制作用。IAA与harpin互作,可调控植物防卫基因、生长素类基因以及PCD相关基因的表达,这种互作机制可能涉及不同于SA、JA或者ET的代谢通路,同时生长素逆转harpin引发的HR可能涉及与氮相关的途径有关。本课题按照项目任务内容,完成了规定的研究任务,发表文章10篇,其中SCI源文章2篇,申请专利4件。