中文摘要：

恶性胶质瘤的化疗耐药机制是临床研究的重点和难点，从化疗耐药相关的特异性靶分子出发研究其相关的作用机制，在个体化治疗和靶向治疗中具有重要的意义。替尼泊苷（VM-26）是临床常用的恶性胶质瘤化疗药物之一，其化疗耐药相关的基因功能改变与miRNA密切相关。我们前期研究显示，miR-21通过调控特异性的靶基因(LRRFIP1)影响胶质母细胞瘤对VM-26的敏感性，但LRRFIP1的具体作用机制不详。进一步研究通过酵母双杂交技术发现，LRRFIP1的下游分子为转谷氨酰胺2（TGM2），且TGM2的表达水平与miR-21的表达呈负相关，提示胶质母细胞瘤的化疗耐药机制可能与TGM2相关。在此基础上，本项目拟利用基因操作、免疫共沉淀及双荧光素酶报告基因等技术，确定TGM2与LRRFIP1协同作用机制，并探索其分子和信号机制。期望发现VM-26耐药相关的特异性分子靶标,为个体化治疗提供理论依据和研究基础。

结论摘要：

我们早期的研究miR-21 通过调控特异性的靶基因(LRRFIP1)影响胶质母细胞瘤对VM-26 的敏感性，随后通过酵母双杂交技术发现，LRRFIP1 的下游分子为转谷氨酰胺2（TGM2），且TGM2 的表达水平与miR-21 的表达呈负相关。在本研究中，利用以下技术和方法1. 利用qPCR法、免疫共沉淀技术验证LRRFIP1和TGM2之间相互作用关系；2. 调控LRRFIP1的表达同时，反向调控TGM2的表达及作用，观察胶质母细胞瘤细胞对VM-26的敏感性。包括，上调LRRFIP1时调控TGM2的表达观察细胞周期和细胞凋亡；3. 采用双荧光素酶报告基因实验验证LRRFIP1，TGM2与NF-κB的关系；过表达LRRFIP1或TGM2，检测U373MG细胞上清液中的NF-κB含量的变化；观察干扰TGM2时，NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达变化。4. 对180例胶质瘤手术患者的标本收集、病例随访、组织芯片制作及染色。时间跨度2007年12月25-2011年12月21日；病理级别WHO Ⅰ～WHOⅣ; 随访时间23个月～71个月。5、进行LRRFIP1、TGM2等蛋白与患者对VM-26化疗敏感的的相关分析。结果1.在U373细胞和U87细胞中下调miR21均发现LRRFIP1的表达出现上调，说明miR21与LRRFIP1表达具有反向相关性；2. U373细胞和U87细胞中下调miR21均发现TGM2表达下调，但同时干扰LRRFIP1后U373细胞和U87细胞的TGM2表达又出现明显相应上调，这证明，miR21与TGM2具有表达正向相关性；LRRFIP1与TGM2具有表达反向相关性。3. LRRFIP1与TGM2双向CO-IP实验结果均为阳性，证明LRRFIP1与TGM2可以直接相互作用。4. 当我们在U87细胞和U373细胞中转染TGM2的小干扰片段siRNA后①细胞的生长、单克隆形成明显受到了抑制。②细胞的细胞周期明显受到了抑制，大量阻滞在G2期。③细胞凋亡明显增加。如果联合使用VM26的药物，上述抑制效果更明显。5.针对其中60例术后仅接受VM-26治疗的患者进行分析，发现LRRFIP1表达越发现LRRFIP1表达越高，接受VM-26化疗的胶质瘤患者预后越好，提示LRRFIP1的表达与胶质瘤对化疗的敏感性呈正比。