中文摘要：

目前认为抑癌基因TGFBR2功能下调会使肿瘤细胞失去对TGF-β的负性生长调节的敏感性，促进肿瘤细胞生长和侵袭。然而TGFBR2突变（20-25%）理论并不足以解释其机制。近来，我们通过对鼻咽癌基因表达谱数据的生物信息学逆向预测并结合预实验结果，发现5个miRNA可能在鼻咽癌中能互补结合TGFBR2的3'UTR，对其实行调控，从而抑制TGF-β负性生长调节作用。为验证假说，本项目将首先验证这5个miRNA在鼻咽癌组织中表达状态（qRTPCR和western blot等）和对TGFBR2的直接抑制性（luciferase 报告基因系统），鉴定出调控TGFBR2的 miRNAs, 然后，从细胞和活体水平证实这些miRNAs抑制TGFRB2表达和促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的功能，据此提出鼻咽癌中miRNA调控TGFBR2的新机制, 为鼻咽癌甚至肿瘤发生发展机制研究及临床防治研究提出新观点。

结论摘要：

我们前期研究发现TGFBR2在鼻咽癌中表达下调，但国内外仍然没有人报道在鼻咽癌中是否存在miRNAs调控TGFBR2的机制。本项目通过比较全面的研究，探索鼻咽癌中可能存在的miRNA介导的TGFBR2下调机制。我们首先证实在鼻咽癌进展过程中TGFBR2的下调是一种不良预后因子，50%以上的鼻咽癌病人其不良预后都与TGFBR2低表达相关。接着，通过临床分析、生物信息学分析和报告基因系统分析等手段发现了5个比较重要的miRNA可能直接调控TGFBR2，并对其中两个比较重要的miRNA (miR-93和miR-20a）进行了进一步的功能和机制的探讨。体内、外实验证实这两个miRNA能够促进鼻咽癌细胞的生长增殖和侵袭转移能力，并可能参与了鼻咽癌细胞EMT的过程。然后，我们进一步发现miR-93和miR-20a介导的TGFBR2下调能导致TGFB-1的细胞内表达和细胞外分泌增加，PI3K/Akt通路活性也有所加强，并影响Smad3的磷酸化水平和细胞周期和EMT相关蛋白的变化。提示在鼻咽癌进展中，miRNA介导的TGFBR2下调的TGFB通路失活与PI3K/Akt激活有着一种潜在性的相互影响，这种影响可能导致鼻咽癌向恶性进展。最后，临床数据进一步支持miR-93和miR-20a的表达与鼻咽癌分期、淋巴结转移以及临床病理分级相关。该项目首次报告了鼻咽癌中存在miRNA介导的TGFBR2的下调机制以及其促进鼻咽癌临床进展的作用。 另外，我们在该项目进行过程中，还获得两个更新的发现（1）发现一个新的病毒的miRNA (Hcmv-miR-ul148D)与miR-93和miR-20a聚类在一起，也在鼻咽癌组织标本中高表达，经研究初步发现与miR-20a和miR-93有类似的功能和作用。有关人群和临床标本验证研究在进行之中。（2）利用生物芯片技术还发现EB病毒编码的几个重要的miRNA 在鼻咽癌中发挥着很重要的作用，其中miR-BART1、miR-BART7和miR-BART3等表达水平最高，初步发现与鼻咽癌发生发展关系密切。我们将在今后针对这两方面开展深入的研究。